鱼食性与肠道菌群关系的初步研究 - 水产前沿网 | 网聚全球水产华人

摘　要：对淡水养殖池中的乌鳢、鲢鱼、鳊鱼、鲫鱼不同食性鱼的后肠菌群进行了定性、定量分析，结果表明：四种鱼的后肠壁和后肠内容物都是厌氧菌总数远大于好氧菌总数；后肠内容物菌数远大于后肠壁菌数；不同的鱼，后肠壁的好氧菌总数差别很大，而厌氧菌总数差别不大；后肠内容物中的厌氧菌总数和好氧菌总数为：乌鳢> 鲫鱼> 鲢鱼> 鳊鱼；而后肠壁细菌含量与食物没有明显的关系；后肠内容物和后肠壁中的双歧杆菌数为：乌鳢> 鲫鱼> 鲢鱼> 鳊鱼。表明后肠内容物中的细菌总数、后肠内容物和后肠壁中的双歧杆菌数都与食性相关。大肠杆菌、肠球菌和乳酸菌在后肠的分布没有规律，说明它们与食物相关性不强。

对鱼类肠道菌群组成的研究，国外曾有一些报道，但未见比较系统的研究。早在1953 年，Margolis发现禁食对鱼肠道菌有影响[1]。1976年Yoshimizu等对鱼肠道沙门氏菌进行了研究[2]。1985年Haruo等对淡水养殖池中罗非鱼、金鱼、鲤鱼等的肠道菌作了研究，指出了鱼肠道存在好氧或兼性厌氧菌、专性厌氧菌[3]。1987年Haruo报道淡水养殖池中弧菌—气单胞菌的稳定，而其它细菌受外界环境因素的影响较大[4]。但Hansen认为鱼类肠道不一定存在稳定的细菌群落[5]。目前，比较统一的认识是鱼类肠道存在细菌。国内对鱼类肠道菌群的研究起步相对较晚，主要集中在条件致病菌与肠道菌群关系的研究[6，、外界因素对肠道菌群影响的研究[8～和肠道菌群对宿主的消化和生长的影响研究[11，等，这些研究说明肠道菌群对鱼类的抗病、生长和发育有重要的意义。但几乎所有的研究都以肠道内容物为研究对象，对肠壁菌群的研究极少，对肠壁与肠道内容物关系的研究则没有。并且，大多数研究以好氧菌为研究对象，对厌氧菌的研究较少。赵庆新等发现不同亚科的鱼间菌群有较大的差异[13]，但这些差异由哪些因素引起，鱼食性影响肠道消化残渣，是否因此而影响居于肠道的菌群，值得探讨。本实验以4 种不同食性的鱼的后肠壁和后肠内容物中的2 种好氧菌、2 种厌氧菌以及好氧菌总数、厌氧菌总数为研究对象，试图揭示肠道壁与肠道内容物的菌群(包括好氧菌和厌氧菌) 之间的关系、鱼肠道菌群与食性的关系，以期为水产鱼类肠道菌群研究提供一些基础数据。

1.2菌液的制备
鱼体随机采集后，用75 %酒精进行鱼体消毒。无菌条件下解剖，取出肠道。75 %酒精棉球擦拭肠管外壁，无菌水反复冲洗，用无菌棉线结扎中肠与后肠、后肠与肛门交界处。剖开后肠，取内含物015 g。再用无菌水将后肠壁冲洗3 遍，剪碎，称取011 g 放入装有玻璃珠的三角瓶内。再分别稀释得到10- 2 ，10- 3 ，10- 4 ，10- 5 ，10- 6 ，10- 7 ，10- 8稀释液。

1.4细菌的计数及鉴定
经FWA ，EG培养后选菌落数在30～300 个之间的平板进行好氧菌总数和厌氧菌总数计数，并换算成每克样品所含菌数量(cfu/ g) 。
4 种细菌的鉴定及定量按康白等介绍的方法进行[7，8，14，。先鉴定4 种选择性培养基的选择性：对每个选择性培养基平板选6个典型菌落进行菌落特征、细菌形态及生理生化特性鉴定，结果证明4种选择性培养基具有高度选择性，即各选择性培养基上的典型菌落就是所需菌落。再对每种培养基上的典型菌进行平板菌落计数，并换算成每克样品所含菌数量(cfu/ g) 。

2 结果与讨论
菌群测定的定量结果见表2 。
由表2可知：各种鱼的后肠壁和后肠内容物都是厌氧菌总数远大于好氧菌总数，厌氧菌是肠道菌群的主要组成成分；好氧菌总数、厌氧菌总数、肠球菌、大肠杆菌、乳酸菌、双歧杆菌都是后肠内容物的远大于后肠壁，说明细菌的生长繁殖场所主要在肠腔。
不同种鱼后肠壁的好氧菌总数差别很大(如鲢鱼后肠壁好氧菌总数是鲫鱼后肠壁好氧菌总数的58倍) ，而厌氧菌总数差别不大(最大数鳊鱼与最小数鲢鱼之间的比值仅为214 倍) 。人肠道菌群在肠道有3个生物层，深层为厌氧菌并和肠壁共生形成生物膜，中层为一些厌氧菌，表层为好氧菌游动于肠腔[16]。鱼类可能也有厌氧菌与肠壁共生形成生物膜，因此含量稳定，而好氧菌可游离于肠腔中间，因此在肠壁的随机波动性很大。
4 种鱼的后肠内容物中的厌氧菌总数和好氧菌总数为肉食性的乌鳢> 杂食性的鲫鱼> 以浮游植物为食的鲢鱼> 草食性的鳊鱼，说明后肠内容物细菌数量和食物的种类有关，也间接的说明后肠内容物的细菌是靠吸收后肠内容物中的养分生存。4 种不同食性鱼后肠壁细菌含量与食物种类没有明显的关系。
4 种不同食性鱼肠道的后肠内容物和后肠壁中的双歧杆菌都是：肉食性的乌鳢> 杂食性的鲫鱼>以浮游植物为食的鲢鱼> 草食性的鳊鱼，这4 种鱼的寿命长短也是乌鳢> 鲫鱼> 鲢鱼> 鳊鱼，许多研究表明双歧杆菌与生物的寿命成正相关[17，，这里也体现了这种相关性，同时说明双歧杆菌的数量与食物种类有关系，肉类食物比植物类食物更适宜双歧杆菌生长，更有利于长寿。大肠杆菌、肠球菌和乳酸菌在后肠的分布没有规律，说明它们与食物的相关性不强。