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标题: 弧菌病药效实验——市场治疗弧菌感染产品的药效实验 [打印本页]

作者: 周zeqin 时间: 2016-1-4 16:18
标题: 弧菌病药效实验——市场治疗弧菌感染产品的药效实验
本帖最后由一片云于 2016-1-11 11:06 编辑

对虾的红体、偷死、肌肉白浊、烂眼烂鳃、荧光、黑斑等症状多由弧菌及嗜水气单胞菌等引起。根据现行国家标准，抗菌类中药制剂有38种。本实验选取水产养殖中常用的大黄末、六味黄龙散、三黄散、根莲解毒散、七味板蓝根散、大蒜素、虾倍健、病毒速灭亡、穿梅三黄散、白头翁口服液、健肝宝、地锦草末12种中药制剂对5株常见的海洋致病菌进行最低抑菌浓度的测定，为水产养殖细菌性疾病的防治提供用药参考。

药物准备：

大黄末（大黄）：每1kg饲料用本品5g

六味黄龙散（龙胆、黄柏、陈皮、厚朴、大黄等）；每1kg饲料用本品4g

三黄散（黄芩、黄柏、大黄、大青叶）；每1kg饲料用本品5g

根莲解毒散（板蓝根、黄芪、穿心莲、鱼腥草等）；每1kg饲料加本品10g

七味板蓝根散（板蓝根、大黄、黄芪、黄柏、黄莲等）；每1kg饲料用本品2.5g

大蒜素（含量：25%）；每1kg饲料用本品0.6g

虾倍健（檵木叶、半边莲花、地胆草等8味）；按本品：虾倍健颗粒为1:3~1:4（土塘1：5）的比例拌匀，于上午喂第一餐料前投喂。

病毒速灭亡（大黄提取液，黄芪多糖等）；每1kg饲料，用本品20ml

穿梅三黄散（黄芩、黄柏、大黄、大青叶、穿心莲等）；每1kg饲料用本品4g

白头翁口服液（白头翁、黄连、黄柏、秦皮）；每1kg饲料用本品3ml

健肝宝（茵陈、大黄、郁金、连翘、柴胡）；每1kg饲料用本品2g

地锦草末（地锦草）；每1kg饲料用本品10g

菌液准备：

1.用接种环挑取标准菌株的菌落，接种于10ml的2216E液体培养基中，37℃孵育18h。

2.用2216E液体培养基校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1×108CFU/ml，经肉汤1∶100稀释。

实验步骤：

1.药物配制：分别取上述药物按包装标示量制备药液。

药物按标示量配制（g/L）

NZ方 —

大黄末 5

六味黄龙散 4

三黄散 5

根莲解毒散 10

七味板蓝根散 2.5

大蒜素 0.6

虾倍健 200

病毒速灭亡 20

穿梅三黄散 4

白头翁口服液 3

健肝宝 2

地锦草 10

药物稀释：取灭菌5mlEP管12管，排成一排，除第1管加入不加水外，其余每管加水1ml，在第1管加入配制好的药液2ml，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取1ml弃去，第12管为不含药物的对照。

3.加菌液：将倍比稀释后不同浓度的药物溶液及菌液分别加到灭菌的96孔板中，每孔各100μl。置于37℃孵育18h。

结果观察：

将孵育后的96孔板取出，无菌操作，每孔取2.5ul涂于2216E琼脂板，18h后，以抑制细菌生长的琼脂板所对应的浓度为最低抑菌浓度。得到以下结果：

药物副溶血弧菌溶藻弧菌哈维弧菌创伤弧菌嗜水气单胞菌

大黄末 - - - - -

六味黄龙散 - - - - -

三黄散 - - - - -

根莲解毒散 - - - - -

七味板蓝根散 - - - - -

大蒜素 - - - - -

虾倍健 + + + + +

病毒速灭亡 - - - - -

穿梅三黄散 - - - - -

白头翁口服液 - - - - -

健肝宝 - - - - -

地锦草末 - - - - -

结果可知，按标示量配制，除“虾倍健”外其他药物均无抑菌作用。

分别取上述药物各16g制备成100ml的浓药液。此时各管药物浓度依次为160、80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156 、0 g/L。

重复上述实验步骤，得到以下实验结果（图）：

中草药以其安全、副作用小、无耐药性等独特的优势，逐渐成为研究和开发的热点，市面上标榜抗菌的中草药五花八门，但加工粗糙，质量良莠不齐，夸大药效，而养殖户面对细菌感染疾病的爆发却无可奈何，抱着尝试的心态，盲目用药，最终用药无效，对中药产品失去信心。然而实验结果也表明了“虾倍健”有别于市面一般的中药产品，对常见的致病弧菌及嗜水气单胞菌均具有良好的抑杀作用。

在实验随机选取的12种养殖过程常用的抗菌中药的实验结果看来，情况令人堪忧，经典的抗菌中药产品——大蒜素、三黄散、七味板蓝根散等最低抑菌浓度均达到80及以上,甚至超过160mg/ml。而虾倍健对各类弧菌的抑菌浓度为0.625mg/ml,比市售中药类抑菌药物高出32倍！