芽胞杆菌在不良环境中可产生特有孢子结构以对抗外界带来的致命伤害，因而芽胞杆菌可耐受饲料制粒中高温、高压、高湿等不良因子，且产生的益生效益显著，近年来已广泛应用在医药、畜牧、水产等领域。伴随芽胞杆菌发酵工艺日趋成熟，生产成本进一步降低，使得芽胞杆菌在各个领域应用空间巨大。但由于技术水平与检测能力受限，传统检测方法最快需2-3天，市场缺乏相应的检测方法。市场产品普遍存在产品以次充好，产品实际活菌数与标识差异较大等现象。很多厂家、分子公司与经销商无法快速辨别产品档次和优劣，错把稀释产品当原菌粉，把低活菌数产品当高活菌数产品购买，进而影响自身产品生产销售。
成都水产科技有限公司微生物研究室通过经验摸索，建立了一条 “望 、闻 、察 、溶 、计”5字方针的芽胞杆菌产品纯度及活菌数级别快速分辩流程，最快1h内得到初步结果，具体判定方法如下：
1、“望”与“闻”：取2g产品于称量纸上均匀摊开，分别观察产品颜色及气味。一般情况下芽胞杆菌原菌粉产品呈黄色至深棕色，且原粉细腻、基本无白色颗粒感；有直接发酵后的腥臭味，无米糠、麸皮、轻质碳酸钙、次粉、滑石粉等载体原料及香精的气味，如图1所示。
2、“察”：取少量产品菌粉于载玻片上均匀摊开，于40倍显微镜下观察。一般情况下原菌粉呈现形态均一的菌团状，基本无反光晶体或片状纤维结构，如图2所示。
3、“溶”：准确称取1g样品至99mL灭菌水中，于20℃、180r/min充分匀质20min。一般情况下原菌粉产品溶解后溶液均一性好，瓶底沉淀摇晃易分散且均一。稀释后的产品溶解后有明显黑色、浅白色或浅棕色颗粒状沉淀物质，瓶壁有颗粒状物质附着，如图3所示。
4、“计”：样品预处理参照上述第4点进行，取100 μL匀质液至900 μL无菌水中振荡均匀，取20μL稀释液涂布于干净载玻片上（面积1平方厘米，约为大拇指盖大小），火焰上方固定、结晶紫染色，100倍显微镜下随机统计3个视野下芽胞数量，并求平均值。当芽胞数<10个，产品芽胞杆菌小于等于每克10亿，当芽胞数介于10-120个，产品芽胞杆菌数约每克100亿；当芽胞数介于120~200，产品芽胞杆菌数约每克1000亿。
小结：芽胞杆菌原菌粉具有芽胞菌株发酵后特有腥臭味、产品颜色为黄色至深棕色、质感细腻、基本无白色颗粒感，产品溶解后溶液均一性好、底部沉淀摇晃易分散，40倍显微镜下菌粉形态均一，100倍显微镜下芽胞数介于120—200个。
芽胞杆菌稀释产品具有不同程度的香味（常见为麸皮、米糠香味）、产品颜色为浅白色或淡黄色、质感较为粗糙甚至出现肉眼可见的白色颗粒，产品溶解后底部可能会出现黑色、浅白色或浅棕色颗粒状沉淀物质，部分产品瓶壁会有颗粒状物质附着，40倍显微镜下可见反光晶体或片状纤维结构，100倍显微镜下芽胞数介于10-120个或基本观察不到芽胞。
来源：通威水产科技频道
作者：苟小兰、赵桂仙、苏艳秋、张良