饲料中添加植物甾醇对草鱼生长的影响

　　摘要：本试验旨在研究饲料中添加植物甾醇对草鱼幼鱼生长、血脂、免疫功能及肠道形态的影响。选取健康、平均体重为(5.32±0.10)g的草鱼幼鱼540尾，随机分为6组，每组3个重复，每个重复30尾，分别饲喂含0(对照组)、10、20、30、40和80mg/kg植物甾醇的试验饲料。养殖试验持续8周。结果表明：1)与对照组相比，饲料中添加植物甾醇显着提高了草鱼幼鱼增重率和蛋白质效率（P<0.05），显着降低了饲料系数（P<0.05）。2)饲料中添加植物甾醇有使血清甘油三酯和胆固醇含量下降的趋势，其中20、30、40和80mg/kg组血清胆固醇含量显着低于对照组（P<0.05），各添加组血清甘油三酯含量均显着低于对照组（P<0.05）。3)与对照组相比，20、30和40mg/kg组血清溶菌酶活性显着上升（P<0.05）；40和80mg/kg组血清C4补体含量显着降低（P<0.05）。4)与对照组相比，30、40和80mg/kg组肠道黏膜厚度显着增加（P<0.05）；20和30mg/kg组肠道脂肪酶活性显着升高（P<0.05）。综上所述，饲料中添加适量植物甾醇能够促进草鱼幼鱼生长、降低饲料系数，并降低血脂，增强免疫以及肠道发育。

　　文/ 广东蔚莱生物科技有限公司

　　关键词：植物甾醇，草鱼，生长性能，免疫

　　植物甾醇是一种具有植物活性成分的甾体类化合物，是植物细胞的重要组成成分，其分子含28-29个碳原子，C-3位羟基是非常重要的活性基团，是一种多功能活性因子。大量研究表明，植物甾醇具有降低胆固醇、抗氧化、抗癌、调节免疫等功能，迄今已开发出多种含有植物甾醇的功能性食品。2008年，我国农业部批准植物甾醇可作为功能性添加剂用于畜禽饲料。近年来，已有不少关于植物甾醇在畜禽生产中的应用研究，但植物甾醇在草鱼等水产动物的研究应用鲜见报道。本试验通过在草鱼幼鱼饲料中添加不同水平的植物甾醇，研究植物甾醇对草鱼幼鱼生长性能、血脂、免疫功能及肠道形态的影响，确定其最佳添加量，并为植物甾醇在草鱼生产上的合理利用提供理论依据。

　　1、材料与方法

　　选取健康、平均体重为(5.32±0.10)g的草鱼幼鱼540尾，随机分为6组，每组3个重复，每个重复30尾，分别饲喂含0(对照组)、10、20、30、40和80mg/kg植物甾醇的试验饲料。

　　试验基础饲粮配方及营养成分表见表1。

　　表1 基础饲粮组成及营养水平（风干基础）

　　1.3饲养管理

　　根据水温、溶氧、天气和鱼的摄食状况进行投喂，每天三次，鱼进箱时浸洗消毒。实验期间，自然光照，每天观察鱼的活动和健康状况，追踪记录死亡和投饲量。定期排污和换水，饲养周期为8周。

　　养殖试验结束后，鱼体饥饿24h后采样。统计每个养殖箱的草鱼尾数并称总重，然后分别采集草鱼的血清与肠道。每桶随机取5尾罗非鱼，用经肝素钠试剂润洗后的注射器进行尾静脉采血，低温静置1h后，以4000r/min离心15min，制得血清样品，置于-80℃冰箱中以备分析。

　　按下式计算增重率、蛋白质效率、饲料系数和成活率：

　　增重率(WGR，%)=100×(终末体重-初始体重)/初始体重；

　　蛋白质效率（PER，%）=100×(终末体重-初始体重)/（总投饵量×蛋白质含量）；

　　饲料系数(FCR)=总投饵量/鱼总增重量；

　　成活率(SR，%)=100×终末尾数/初始尾数。

　　1.5.2血清生化指标的测定

　　将采集的血清从-80℃冰箱取出，解冻后待测。采用试剂盒测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量。测定方法按照北京北化康泰临床试剂有限公司试剂盒使用说明。

　　将采集的血清从-80℃冰箱取出，解冻后待测。血清溶菌酶活性采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定，补体C4含量采用浙江伊利康生物技术有限公司的试剂盒测定

　　1.5.4肠道脂肪酶及黏膜厚度的测定

　　肠道脂肪酶活性采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定。中肠经过AFA固定、乙醇逐级脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、切片(5μm)、苏木精－伊红(HE)染色、脱水、透明、中性树脂封片。在每组选取9张非连续性切片，用LeicaMD4000B显微镜观察并拍照，每张切片随机选取3个视野，图像由MoticImagesPlus6.0软件进行测量和计算黏膜厚度，分别取其平均值作为该样品的测定结果。

　　试验数据经Excel初步统计，采用SPSS18.0软件进行方差分析，用Duncan法进行多重比较。以P＜0.05作为差异显着性判断标准，结果以平均值±标准差表示。

　　2.1植物甾醇对草鱼幼鱼生长性能的影响

　　植物甾醇对草鱼幼鱼生长性能的影响见表2。

　　由表2所示，饲料中添加植物甾醇的各试验组草鱼终末体重和增重率均高于对照组，其中添加20、30、40mk/kg植物甾醇的试验组的草鱼终末体重、增重率显着高于对照组（P＜0.05）；添加植物甾醇的各试验组的蛋白质效率均显着高于对照组（P＜0.05），添加20、30、40、80mg/kg植物甾醇的试验组的饲料系数显着低于对照组和10mg/kg试验组（P＜0.05），饲料中添加植物甾醇的各试验组草鱼幼鱼的成活率与对照组相比差异不显着（P＞0.05）。

　　表2 植物甾醇对草鱼幼鱼生长性能的影响

　　同行数据肩标相同字母或无字母表示差异不显着（P>0.05），不同小写字母表示差异显着（P<0.05）。下表注释同。

　　2.2植物甾醇对草鱼幼鱼血脂的影响

　　植物甾醇对草鱼幼鱼血脂的影响见表3。

　　由表3所示，与对照组相比，饲料中添加植物甾醇的各试验组草鱼血清总胆固醇和甘油三酯含量均有降低的趋势，其中添加20、30、40、80mg/kg植物甾醇的试验组总胆固醇含量显着低于对照组（P＜0.05），添加植物甾醇的各试验组甘油三酯含量均显着低于对照组（P＜0.05）。

　　表3 植物甾醇对草鱼幼鱼血脂的影响

　　2.3植物甾醇对草鱼幼鱼免疫功能的影响

　　植物甾醇对草鱼幼鱼免疫功能的影响见表4.

　　由表4所示，饲料中添加植物甾醇提高了草鱼血清中溶菌酶的活性，其中添加20、30和40mg/kg试验组血清溶菌酶活性显着高于对照组（P<0.05）；添加植物甾醇的各试验组血清C4补体含量有降低趋势，其中添加40和80mg/kg试验组血清C4补体含量显着降低（P<0.05）。

　　表4 植物甾醇对草鱼幼鱼血清免疫指标的影响

　　2.4植物甾醇对草鱼幼鱼肠道脂肪酶和形态指标的影响

　　植物甾醇对草鱼幼鱼肠道脂肪酶和形态指标的影响见表5。

　　由表5所示，饲料中添加植物甾醇能增强草鱼肠道脂肪酶活性和增加肠道黏膜厚度，其中添加20和30mg/kg试验组的草鱼肠道脂肪酶活性显着高于对照组（P＜0.05），添加30、40和80mg/kg试验组的草鱼肠道黏膜厚度显着高于对照组（P＜0.05）。

　　表5 植物甾醇对草鱼幼鱼肠道脂肪酶和形态指标的影响

　　3、讨论

　　3.1植物甾醇对草鱼幼鱼生长性能的影响

　　研究表明，植物甾醇在动物体内的作用与激素类似，具有一定的激素活性，与植物生长激素以及能在水中形成分子膜的脂质相结合，形成植物激素-植物甾醇-核糖核蛋白复合体，可以促进动物蛋白质的合成，促进动物生长。程业飞等在育肥猪饲料中分别添加30mg/kg普通植物甾醇和乳化植物甾醇，育肥猪的平均日增重ADG相比于对照组分别提高了2.17%和4.38%，料重比有所降低。姬红波等研究结果表明，添加20mg/kg植物甾醇，肉鸡生长前期（1~21d）和生长后期（22~42d）的平均日增重（ADG）分别显着提高5.92%和4.26%（P＜0.05），生长后期（22~42d）料肉比降低4.48%（p＜0.05）。张严伟等研究发现，添加40、80mg/kg植物甾醇可显着提高团头鲂质量增加率及特定生长率（P＜0.05）。本实验室在吉富罗非鱼饲料中添加20、40mg/kg植物甾醇其增重率分别显着提高了12.92%和7.12%（P＜0.05），其饲料系数也分别显着降低了10.62%和5.31%。本试验结果与上述研究结果一致，添加不同水平的植物甾醇均能促进草鱼的生长，降低饲料系数，显着提高蛋白质效率（P＜0.05），促进蛋白质沉积，这是因为植物甾醇作为类固醇激素的前体物质，具有类激素功能，能与靶细胞受体结合，激发DNA的转录活动，生成新的mRNA，诱导蛋白质的合成。

　　3.2植物甾醇对草鱼幼鱼血脂的影响

　　血清中总胆固醇、甘油三酯等含量反映了机体脂质代谢的情况。早在上世纪50年代，就有研究发现从膳食中摄入植物甾醇越多，胆固醇的吸收率就越低，血清中胆固醇的含量就越低。近年来大量动物试验研究结果表明饲料中添加植物甾醇能降低血清中总胆固醇含量。程业飞等研究发现在育肥猪饲料中添加30mg/kg普通植物甾醇或乳化植物甾醇均显着降低了血清总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）水平（P＜0.05）。侯艳君等在异育银鲫饲料中添加不同水平的植物甾醇，血浆胆固醇含量均显着降低（P＜0.05），80mg/kg和120mg/kg添加组的甘油三酯含量显着低于对照组（p＜0.05）。本实验室在吉富罗非鱼饲料中添加20、40、160mg/kg植物甾醇，总胆固醇、甘油三酯水平显着低于对照组（P＜0.05）。在本试验中添加不同水平的植物甾醇，草鱼血清总胆固醇和甘油三酯含量均显着降低，与文献结果一致。因此植物甾醇能降低血脂，对草鱼的脂质代谢具有一定的调节作用。

　　3.3植物甾醇对草鱼幼鱼血清免疫指标的影响

　　溶菌酶作为机体的体液免疫指标，在动物免疫防御中发挥重要作用，其活性高低是决定吞噬细胞能否杀灭所吞噬致病菌的物质基础之一。本试验条件下，添加植物甾醇提高了草鱼血清溶菌酶的活性，表明植物甾醇具有一定的免疫调节功能，能提高机体的免疫力。补体系统广泛存在于血清、组织液和细胞膜表面，可广泛参与机体免疫调节，是机体内具有重要生物学意义的蛋白质反应系统和免疫效应放大系统，而C4为补体系统中的重要组分，在机体防御过程中可通过免疫复合物、调理吞噬细胞等机制对病原微生物进行清除及活化炎性细胞对靶细胞的杀伤作用。本试验在草鱼幼鱼饲料中添加40mg/kg和80mg/kg植物甾醇组的草鱼血清中补体C4的水平显着降低，可能是因为植物甾醇添加过量则抑制了补体C4的活性。

　　3.4植物甾醇对草鱼肠道脂肪酶和形态指标的影响

　　侯艳君等研究发现，添加40mg/kg植物甾醇组的异育银鲫肠道内脂肪消化酶活性相比与对照组显着提高（P＜0.05），本试验中添加20、30mg/kg植物甾醇组的草鱼肠道脂肪酶的活性也显着升高，促进了鱼体脂质代谢。另有研究发现在改善仔猪小肠绒毛形态上，植物甾醇的应用效果较多粘菌素E更为显着，胡巧玲等研究表明添加植物甾醇显着提高了仔猪十二指肠和空肠的绒毛高度/隐窝深度（P＜0.05），本试验在草鱼幼鱼饲料中添加植物甾醇也增加了肠道黏膜厚度，以30、40、80mg/kg添加组尤为显着，改善了肠绒毛形态，有利于肠道健康，促进营养物质的消化和吸收。

　　4、结论

　　在饲料中添加植物甾醇能促进草鱼的生长，提高蛋白质效率并降低饲料系数，且能提高肠道脂肪酶的活性，降低鱼体总胆固醇和甘油三酯的含量，还能提高鱼体的免疫机能，并改善鱼体的肠道健康。在本试验条件下，草鱼幼鱼配合饲料中植物甾醇的最适添加量为30mg/kg。

　　蔚莱生物·生长因子定向激活专家

　　——蔚莱1号（植物甾醇）