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水产品中孔雀石绿残留快速检测技术现状与突破

2019-10-22 16:53| 发布者: 御城雪| 查看: 52262| 评论: 0|原作者: 广东达元绿洲食品安全科技股份有限公司 李斌、梁科|来自: 中国水产频道

摘要: 中国水产频道报道,水产品在我国动物产品消费中始终占有重要位置,消费份额较大,全国人均水产品消费约占猪牛羊肉消费量的一半。
  中国水产频道报道,

  水产品在我国动物产品消费中始终占有重要位置,消费份额较大,全国人均水产品消费约占猪牛羊肉消费量的一半。目前国内市场的水产品主要以鲜活为主,伴随国民生活水平的提升,对水产品需求量也在逐年增加,也促使了水产养殖业的快速发展,但同时也引起了不少的质量安全问题。养殖户为了有效的预防鱼类的疾病,增加产量,会偷偷的非法使用禁用药物,加之操作不规范,会导致水产品质量下降,如果人食用了药物超标的水产品,严重的会有生命危险。目前水产质量安全问题已日益突出,引起了政府和人们的广泛关注。因此,解决水产中禁用药物的快速检测问题也是迫在眉睫。水产品的质量安全是全国人民享有健康生活的重要保障,而水产品中违禁药物的残留是当前危害最严重的因素之一,孔雀石绿是其中最具有代表性的一种。
  
  2014年9月,深圳特区布吉海鲜市场开展了一次名为“清水行动”的水产品专项执法监督抽查。在这次行动中,执法部门共抽检了43家水产品经营户,共抽取样品121份,其中淡水鱼样品90份。经检测,发现7个水产品样品检测不合格(其中孔雀石绿超标5个,硝基呋喃代谢物超标2个);2016 年底,国内媒体“热搜”的北京超市“活鱼下架事件”,社会普遍认为与孔雀石绿等的滥用有关;2019年4月,省农业农村厅委托山东省水产品质量检验中心对临朐县水产品进行了质量安全抽检,被抽检的6个鲟鱼样品检验呈阳性,检验结果结果为孔雀石绿含量超标;同年6月,杭州市消保委对本志7家买菜类APP进行消费评测,结果为杭州美团、叮咚买菜的鳜鱼、天津永辉超市草鱼被检出孔雀石绿超标。由此可见,孔雀石绿残留问题已成为一个日益突出的食品安全问题。
  
  什么是孔雀石绿?
  
  孔雀石绿作为染色剂,用于皮革业、纺织业、制陶业、食品和生物的染色,是人工合成的三苯甲烷类化学物。同时,孔雀石绿也可以用作杀菌剂,驱虫剂,用于预防与治疗水生动物细菌、真菌和寄生虫的感染,由于其成本低,效果显着,所以被普遍用在水产养殖业中。然而随着研究的深入,孔雀石绿的高毒性,高残留的性质及潜在的致畸、致癌、致突变等毒副作用倍受大家的关注。鉴于其潜在的致癌性,美国、加拿大、日本、欧盟等许多国家将其 列为水产殖禁用药物。欧盟法案2002/675/EC规定,动物源性食品中MG和LMG残留总量限制为2μg/kg;日本的肯定列表明确规定在进口水产品中不得检出MG残留。我国于2002年5月将孔雀石绿 列入《食品动物禁用的兽药及其他化合物清单》中,于2005年制定了孔雀石绿的使用标准,规定在水产品中,MG 和LMG的残留总限量不得超1 μg/kg。 但违规使用孔雀石绿的事件时有发生,如欧盟、日本、中国香港等国家和地区曾从我国大陆进口的鳗鱼中检出MG及LMG残留,不仅影响生态环境,还成为影响我国食品质量安全和国际市场竞争力的重要因素。
  
  检测技术的应用
  
  孔雀石绿进入动物体内后会快速代谢为无色孔雀石绿,无色孔雀石绿为脂溶性物质,相较孔雀石绿而言毒性更强,基本无法代谢。国内外均以孔雀石绿和其代谢物无色孔雀石绿的总量为测定指标,目前测定方法主要有仪器分析测定(高效液相、液相色谱质谱联用等)、免疫学检测技术(酶联免疫检测技术、胶体金检测技术等)和微光探测与免疫学技术的结合(荧光定量检测技术)。从快速筛查市场而言,后两种方法已逐渐成为检测市场的主流。
  
  1. 仪器分析法
  
  主要是指利用气相色谱法、气相色谱-串联质谱法、液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法或各类光谱仪等大型精密仪器来进行药物残留的分析方法。此类方法是一种准确性高、灵敏度高、特异性好、选择性强的检测方法,现普遍用于检测兽药和农药残留,许多国家和地区已将高效液相色谱-串联质谱法作为检测孔雀石绿残留的确证方法。但此方法需要昂贵的仪器和专业的技术人员操作,且无法实现大批量快速检测,相对成本较高,不具备现场快速筛查的优势。
  
  2. 免疫学检测技术
  
  免疫学检测技术是利用抗原抗体的特异性结合的原理,相对仪器分析法而言,具有的最大优势为操作便捷,利于市场的快速筛查。现阶段,食品安全的快速检测技术主要有酶联免疫检测技术和胶体金检测技术。
  
  2.1 酶联免疫检测技术
  
  其原理是应用抗原和抗体的特异结合与酶催化作用的有机结合,利用酶促反应原理有较的放大了免疫检测的效果,具有较高的灵敏度,同时还具备了定量检测的特性。酶免检测技术的优点是检测灵敏度高、特异性好、高通量和高精密度的特点,且无需大型仪器设备,可进行大批量的样品初筛检测。虽然酶免较仪器法具有一定的优势,但由于其检测时需专业人员操作,检测时间较长,同样也无法满足现场快速筛查的需求。
  
  2.2 胶体金检测技术
  
  胶体金检测技术是以纳米金颗粒作为示踪标识物,应用抗原和抗体具有特异性结合的原理所建立的新型免疫标记技术,是色谱层析技术和纳米金技术的有机结合。胶体金检测技术的优点就是操作简单、检测时间短和无需专业技术人员操作。因为这些特性,使得胶体金技术广泛应用于大分子类蛋白、农药残留、兽药残留、小分子类药物和毒素类等的快速检测中。虽然胶体金法具有一定的优势,但由于其较差的灵敏度,无法满足国家检测标准的要求,加大了漏检的风险。
  
  3. 微光探测与免疫学技术的结合
  
  随着各类学科交叉的不断深入,现代快速检测技术越来越趋向于便携、操作简单快捷、检测结果即时准确的方向发展,使得开发出的相应产品具有极大的市场潜力,而荧光定量检测技术就是食品安全快速检测市场中最具代表性的新型检测方法。此方法是免疫学技术、色谱层析技术、生物探针技术和微光探测技术的有机结合,兼具仪器分析法、酶联免疫检测技术、胶体金检测技术的优点,取长补短,在保持仪器法高精确性的同时还保留了胶体金法检测的快速、简便和酶免技术的高灵敏度、可定量的特点。
  
  孔雀石绿检测技术的发展
  
  孔雀石绿的残留主要体现在水产品中,特别是在高油酯的鱼类中尤为明显,所以针对孔雀石绿的检测对象主要为可食用组织,我国根据此种情况也建立了孔雀石绿在可食用性组织中的国家检测标准,但由于其需要昂贵的仪器和复杂的样本处理过程,使得在现场快速筛查和基层执法部门中无法大量推广。在快速检测产品中,孔雀石绿酶免试剂盒最早进入快筛市场,但由于其繁琐的操作过程,很快被胶体金产品所取代。孔雀石绿胶体金产品虽然检测速度快,只需30-45分钟,但胶体金较差的灵敏度,也增加了漏检的风险;同时,组织类的样本前处理依然复杂、费时,存在着离心、吹干等步骤,不仅增加了人力成本,也使得在吹干大量溶剂时,严重污染了环境。对于吹干的问题,市场一直在寻求解决的方法,近年来市场上推出的SPE产品就是对吹干这一步骤的优化处理。SPE方法的优点是省略了吹干环节,使得处理速度有了一定的提升,但同样存在着一些不足:1、步骤和仪器未得到省略,离心及相应的仪器仍需使用,吹干步骤换成了过SPE柱,同时也增加了固相萃取仪;2、增加了成本,SPE柱成本较高,约增加20-40%;3、浪费溶剂,吸附和洗脱时均需大量试剂;4、洗脱效率不稳定等。
  
  针对目前快速检测方法仍然存在的问题,我司经过了长时间的技术攻关,结合高分子纳米材料和免疫层析卡的优点,开发了全新的孔雀石绿残留快速检测卡,并结合先进的专利数据采集技术,国内外首创地研制出了全新的孔雀石绿FST快速前处理方案(包含胶体金和荧光层析系列产品),较传统的检测产品相比,检测效率提高两倍以上,灵敏度更优,精密性更好,智能化更高。产品如下图:
  
  FST快速前处理方案
  
  FST的技术理念基于组织类样本的快速、便捷的前处理方案,是我司专门为解决繁琐的组织类样本前处理而开发的,是组织类样本POCT技术的一大突破,为国内外首创。其特点是省略了离心、吹干或上萃取柱步骤,实验全程只需一把移液器即可完成,极大缩短了样本检测时间。
  
  目前,我司的FST系列产品包括两大类:FST-胶体金和FST-荧光层析。孔雀石绿FST-胶体金产品在保持同类市场的高灵敏度的前提了,把组织类的样本处理进行了极简化处理,处理时间从常规的25-40分钟缩短为 10分钟以内,整个检测过程无需任何辅助仪器,极大的节省了人力和物力成本,且此类产品顺利通过了2018年的农业部验证和2019年的广东省快检验证。
  
  孔雀石绿FST-胶体金产品虽然在性能上有了很大提升,但其不能定量的不足也始终无法解决,针对这一难点,我司专门开发FST-荧光层析系列产品。孔雀石绿FST-荧光层析产品结合了高分子纳米技术和微光探测技术,是在FST-胶体金产品性能上的进一步提升,具有灵敏度高(可达液相质谱的灵敏度要求)、样本处理快速(缩短为5分钟以内)、抗干扰能力更强(大稀释比例降低了样本对产品的干扰)、半定量的检测(检测结果以数据显示)、数据即时处理(数据即时存储或打印)等优势。孔雀石绿FST-荧光层析产品顺利通过了2018年农业部验证,为全场时间最快,检测灵敏度最高的快速检测产品。为了更好的区分现有市场中主流检测产品间的差异,下表针对参加2018年农业部验证的相关技术产品做了简单的技术比较:

  结论与展望
  
  水产品是国民餐桌上的重要组成,国家政府也一直致力于解决食品的安全问题,近年来更是针对水产品的药物残留加大了抽检力度,而孔雀石绿一直是人民关注的重点,但由于现有检测技术的样本前处理较繁琐,使得抽检率无法大幅提升。因此,随着政府的进一步加强,快筛市场对现有检测技术也必将提出更高的要求。快速、便捷、准确、智能化等一直是快速检测的重要需求,而我司的FST前处理技术恰巧是对这一需求的极大补充。随着FST技术的进一步发展,相信对监管孔雀石绿的滥用具有重要意义。
  


  【关键字】:孔雀石绿  水产品  检测  水产养殖
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