中华鳖膨化饲料养殖试验

　　

　　文/图 湖州亿美饲料有限公司  张冰杰   苏州大学基础医学与生物科学学院  叶元土

　　

　　中华鳖（Pelodiscus sinensis）属爬行纲龟鳖目鳖科鳖属，随着其繁育技术的突破和人工控温养鳖技术的发展，我国中华鳖养殖业快速发展。

　　

　　中华鳖养殖目前普遍使用粉状配合饲料，粉状配合饲料在水中稳定性差，容易污染水质，易引发病害，投喂技术繁琐；并且中华鳖以动物性蛋白为主，近年来鱼粉价格上涨限制了中华鳖养殖业的发展，自此迫切需要开发经济的、高效的、使用方便的鳖配合饲料以满足鳖的养殖生产需求。

　　

　　膨化饲料不仅可以提高饲料消化吸收率，杀灭饲料中的细菌和霉菌等，还具有稳定性好，不污染水质，储存、投喂方便等优点。本试验研究了膨化饲料对中华鳖生长、全鱼营养组成及血清和肝胰脏理化指标的影响，为鳖用膨化饲料的研究工作积累资料，促进我国中华鳖养殖业的健康可持续发展。

　　

　　一、试验材料和方法

　　

　　1、试验设计

　　

　　试验所用中华鳖品种为日本中华鳖，选用体质健壮、健康无病害的中华鳖随机分为5个养殖试验组，对照组设置8个平行，其余四组每组设置4个平行，每个平行放养25尾中华鳖。

　　

　　2、饲料配方与加工方式

　　

　　试验饲料根据中华鳖营养需求进行合理的制备，配方见表1，粗蛋白含量46%。选用同样蛋白水平的商品中华鳖粉料（鱼粉用量保持一致）作为对照。

　　

　　3、养殖试验条件与饲养管理

　　

　　试验日期从2007年12月26日到2008年3月26，为期3个月。水温30-32℃，室内气温32-34℃，pH=6.5-7.5，透明度20-30cm，OD≥4mg/L。试验养殖池面积48m2，池深60cm，养殖水深55cm，在养殖池塘内设置摄食台，摄食台距水面3-4cm，每天投喂3次，对照组投喂中华鳖粉料，预先做成软颗粒再投喂，其他四组投喂中华鳖膨化料直接投喂，并根据吃食情加以调整投喂量。

　　

　　4、样品采集与试验检测指标方法

　　

　　（1）生长指标及其方法

　　

　　饲养试验结束后，对试验鱼进行称重并统计总投饲量，饲料系数、蛋白质效率的计算方法如下：

　　

　　饲料系数=饲料摄入量/鱼体增重量

　　

　　蛋白质效率 = 鱼体增重量/蛋白质摄入量

　　

　　蛋白质沉积率（PDR，%）=（试验结束时鱼体总干物质重×试验结束时鱼体粗蛋白含量-试验开始时鱼体总干物质重×试验开始时鱼体粗蛋白含量）/（消耗饲料总干重×饲料粗蛋白含量）×100

　　

　　脂肪沉积率（FDR，%）=（试验结束时鱼体总干物质重×试验结束时鱼体粗脂肪含量-试验开始时鱼体总干物质重×试验开始时鱼体粗脂肪含量）/（消耗饲料总干重×饲料粗脂肪含量）×100。

　　

　　（2）全鱼常规指标及其测定方法

　　

　　全鱼样品采集方法：每个养殖池塘随即取3尾鱼，70℃常压干燥法测定水分；粗蛋白采用凯氏定氮法（GB/T6432-94）；粗脂肪的测定采用氯仿甲醇法；高温灼烧法测定灰分含量（GT/T6438-92）。

　　

　　（3） 血清和肝胰脏指标测定方法

　　

　　血清样品的采集：采用尾静脉取血法，每池取试验鱼8条取血。其中随即取三条鱼全血当场用于血红蛋白测定；将鱼血先分开用2500r/min离心15min后再10000r/min二次离心15min，吸取血清混匀并分装在0.5ml Eppondorf管中，取一支0.5ml大小血清置于4℃冰箱中在24小时内送至医院分析测定中心测定部分酶学和生化指标，其余血清用液氮速冻后置于-80℃低温冰箱中冷冻保存待用。

　　

　　肝胰脏样品处理方法：解剖后立即取肝胰脏，按1：10比例用0.2mo1 / L，pH7.4的磷酸缓冲液冰冻匀浆，匀浆液在冰冻离心机上6000r/min离心15分钟，取上清液作为粗提液。

　　

　　转氨酶活力测定方法：将0.1ml待测样品（空白管用磷酸缓冲液代替）与0.5ml的GPT基质液（α-酮戊二酸29.2mg及α-DL-丙氨酸1.78g溶于50mlpH7.4的磷酸缓冲液中，加0.1mol/L NaOH溶液约0.5mL，调节pH为7.4，然后加磷酸缓冲液定容至100mL）摇匀后置37℃水浴保温30min，立即加入2，4-二硝基苯肼0.5mL，20min后再加入5mL0.4mol/L的NaOH，充分摇匀后在30min内520nm波长下比色。根据样品管A520值（已减去空白管A520）查标准曲线，即得每100mL样品中转氨酶活性单位数，进而换算出1g肝胰脏中转氨酶活性单位数。

　　

　　血红蛋白含量：饲养试验结束后，从各试验组随机取鱼3-4尾，尾静脉取血，迅速用于测定血红蛋白含量。血红蛋白测定（Hb）使用上海科欣生物技术研究所生产的试剂盒。将试剂Ⅰ20ml和试剂Ⅱ20ml混和，用蒸馏水稀释至1L，制备成应用液。取20u1未凝血加入到5m1应用液中，充分混合。静置5分钟后540nm处比色，用蒸馏水做空白管，调光密度为零，测定样品管的吸光度，根据标准曲线求出血红蛋白含量。

　　

　　（4）统计分析方法

　　

　　试验数据以平均值±标准差表示。利用SPSS13.0软件进行统计，先进行单因素方差分析（One-Way Analysis，ANOVA），差异显著者再进行Duncan氏多重比较，P<0.05表示差异显著。

　　二、试验结果与分析

　　

　　1、中华鳖生长性能和饲料系数的影响

　　

　　不同试验饲料组对中华鳖成活率、增重率和饲料系数的影响见表2，显示出试验饲料D组在成活率、增重率和饲料系数方面有显著性优势，但与对照组相比，成活率和增重率显著性差异不明显，而饲料系数呈现显著性降低的趋势。

　　

　　2、试验饲料对中华鳖肝体比影响

　　

　　中华鳖各试验组之间肝体比差异不显著（P＞0.05），其中试验组C比值最大，为4.40%；D组最小，为3.43%。

　　

　　3、中华鳖全鱼和肝胰脏常规营养成分分析

　　

　　中华鳖全鱼对照组蛋白质含量与试验组A、C、D之间差异显著（P<0.05），各试验组之间均有显著性差异（P<0.05）；全鱼对照组脂肪含量与试验组A、C、D之间有差异（P<0.05）；中华鳖粗灰分全鱼中对照组仅与试验组D之间差异显著（P<0.05），各试验组中只有D与A、B、C之间有显著性差异（P<0.05），且试验组D粗灰分含量最高达22.36%；全鱼磷含量试验组A与其它各组（差异不显著（P>0.05））之间差异显著（P<0.05）。

　　

　　在肝胰脏中对照组蛋白含量与试验组之间有显著性差异（P<0.05），各试验组中除B、C之间差异不显著（P>0.05）外都有显著性差异（P<0.05）。肝胰脏对照组与各试验组之间差异显著（P<0.05），对照组中脂肪含量最高为64.79（%），试验组D最低50.57（%）。肝胰脏灰分含量各试验组及对照组之间均无显著性差异（P>0.05）肝胰脏中磷含量对照组与各试验组之间差异显著（P<0.05），试验组A、B、C之间无差异（P>0.05），但它们与试验D有差异（P<0.05）。

　　

　　4、试验饲料对中华鳖谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性的影响

　　

　　谷草转氨酶（GOT）活性统计分析可得（见表6），血清各试验组之间均有显著性差异（P<0.05）；就肝胰脏而言对照组与试验A之间无显著性差异（P>0.05）外和其它各组都有显著性差异（P<0.05），其中试验组C和D之间无显著性差异（P>0.05）,但它们与试验组A和B有显著性差异（P<0.05）。其中A组的血清和肝胰脏GOT均最低。

　　

　　从表7结果统计分析可以看出，各试验组肝胰脏谷丙转氨酶（GPT）之间均有显著性差异（P<0.05），其中以试验B组最高，依次为试验D组、C组、对照组和A组。

　　

　　5、试验饲料对中华鳖血红蛋白含量的影响

　　

　　中华鳖全血血红蛋白含量的结果分析见表8，试验对照组与试验B组和C组之间差异不显著（P>0.05），与试验A组和D组有显著性差异（P<0.05）。试验组A、B、C、D之间差异显著（P<0.05）。

　　

　　6、试验饲料对中华鳖非特异免疫水平的影响

　　

　　从表9、表10可以看出，血清SOD对照组除与试验组D有显著性差异外，与试验组A、B、C均差异不显著（P>0.05）；血清LSZ中对照组仅与试验组C差异显著（P<0.05），试验组A、B、D之间无显著差异（P>0.05），但都与试验C组有显著性差异（P<0.05）。肝胰脏方面，对照组SOD只与试验组A差异显著（P<0.05），各试验组之间除试验组B和D之间差异不显著（P>0.05），其它均有显著性差异（P<0.05）。

　　

　　7、试验饲料对中华鳖蛋白质沉积率和脂肪沉积率的影响

　　

　　从表11得出：对照组的蛋白质沉积率显著低于A、B两组（P<0.05），且与C、D两组没有显著性差异（P>0.05），C组高于D组（P<0.05）；对照组的脂肪沉积率与B、C两组无差异性（P<0.05），显著低于B组（P<0.05），均高于D组（P<0.05）。

　　

　　三、讨论分析

　　

　　1、不同试验饲料组对中华鳖生长性能、饲料利用率和生化组成的影响

　　

　　由试验结果可知，试验饲料D组表现出明显的生长优势，且与对照组无显著性差异，而在饲料的利用率上面，试验饲料D组的利用率较高，饲料系数较低，这说明膨化饲料如果在营养组成上符合中华鳖的营养要求，那么制成膨化饲料后，其生长优势不会低于粉料，并且养殖的饲料系数要低于粉料。这说明膨化饲料饲料转化效率方面优于粉状饲料，由于在膨化饲料的加工工艺过程中，提高了原料的熟化度。而在蛋白沉积率和脂肪沉积率方面，试验组的平均值高于对照组，这也说明了膨化料的吸收要比粉料高。

　　

　　本试验中中华鳖的肝体比在试验饲料D组显著低于其他试验饲料各组。鱼体肝体指数的变化，反映了鱼体对自身物质和能量的消耗和利用，所以肝体比指标和鱼体的常规生化组成也是是衡量鱼类营养状况的一个生理指标。

　　

　　2、不同试验饲料组对中华鳖肝胰脏和血清中GOT和GPT的影响

　　

　　谷草转氨酶（GOT）和谷丙转氨酶（GPT）是鱼体内氨基酸代谢过程的重要氨基酸转氨酶，GPT主要在催化α-酮戊二酸与天冬氨酸生成谷氨酸与草酰乙酸的反应过程中起氨基转移作用，而AST主要在催化α-酮戊二酸与丙氨酸生成谷氨酸与丙酮酸的反应过程中起氨基转移作用。

　　

　　正常情况下血浆中这两种酶的活性较低，当鱼体受到污染物暴露而使肝脏受到损伤时，这两种酶会大量释放到血液中，引起血浆中GPT和GOT活性增强而在肝脏中具有较高的活性。

　　

　　本试验中试验A和D组中的GPT和GOT较对照组、试验组B和试验组C在血清中的活性都低，而试验D组两种转氨酶在肝胰脏中的活性较其它试验各组都高，说明试验D组作为膨化饲料配方较其它试验组和对照组有明显的促进蛋白利用的优势。目前关于不同加工工艺对两种转氨酶活性变化的影响报道较少，目前两者的报道有给奶牛饲喂141.6g/d、283.2g/d 共轭酸可以显著降低奶牛血清中谷草转氨酶的含量，缓解炎热环境对奶牛机体的损伤。本试验在饲料中添加共轭亚油酸饲养草鱼8周后，结果显示共轭酸可以显著降低草鱼血清谷草转氨酶的活性，并使血清谷丙转氨酶活性有较大幅度降低。

　　

　　机体中血清蛋白的含量变化与机体健康、营养和疾病密切相关。在本试验中试验D组血红蛋白含量较高，反应了试验D组的饲料有效促进了中华鳖的生长，提高了中华鳖的抗病能力。

　　

　　3、试验饲料对中华鳖非特异免疫水平的影响

　　

　　溶菌酶在脊椎动物和无脊椎动物的天然免疫防御中发挥重要作用。主要作用机制是水解革兰氏阳性菌细胞壁的主要成分肽聚糖中N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β-1，4糖苷键，破坏细菌细胞壁，使细菌溶解死亡；其次改良后的溶菌酶可溶解一部分革兰氏阴性菌；第三溶菌酶水解肽聚糖后，释放的肽聚糖碎片能诱导各种抗菌蛋白的合成与分泌；第四清除其它抗菌免疫因子作用后所残余的细菌细胞壁。此外，溶菌酶还能作为一种调理素，激活机体的补体系统和吞噬细胞。本试验中只有试验C与其他各组有显著差异，其它各组之间无显著性差异。

　　

　　SOD的活性与水生生物的免疫水平密切相关，对于增强吞噬细胞防御能力和整个机体的免疫功能有重要作用。在本试验中，试验A组较其它各组SOD酶活性较高，说明试验A组在提高中华鳖抗病能力方面的有很好的效果。

　　

　　四、小结

　　

　　对照组（粉料组）和四组实验组（膨化料组）在生长性能、饲料系数、氨基酸转移酶和免疫指标等方面结果分析表明，使用膨化料比使用粉料养殖中华鳖的效果要好，说明使用膨化料养殖中华鳖是可行的，为中华鳖膨化料更进一步的研究、推广提供了可靠的依据。