中国水产频道报道，不同种类的微孢子虫会对对虾的肌肉组织，心脏，性腺，鳃，肝胰脏，和神经节产生感染。对虾微孢子虫被视为对虾群体一个潜在威胁，并且会对水产养殖业的经济效益造成影响。近期，一种叫对虾肠胞虫病(EHP)的微孢子被发现存在于对虾的肝胰腺中的小管上皮细胞的细胞质中。在一些东南亚国家，例如越南，泰国，马来西亚，印度尼西亚，中国和印度的对虾养殖场已经相继发现此类微孢子的存在。对虾肠胞虫病(EHP)的临床症状还未具体化，但已发现与对虾发育迟缓有关联。 对虾肠孢虫病(EHP)的组织病理学 在检查被对虾肠孢虫病（EHP）感染的来自越南的南美白对虾（2014）样本中发现肝胰腺小管上皮细胞的细胞质中存在嗜碱细胞内含物（图1A&1B）。在这实验中，孢虫呈现出原形体阶段,成熟嗜碱性的孢子也被检测到。被对虾肠孢虫病（EHP）感染的来自文莱的蓝对虾（2006）也发现微孢子虫存在于肝胰腺（图1C）。这些结果显示对虾肠孢虫病（EHP）早在2006年就存在在亚洲。 对虾肠孢虫病的聚合酶链反应
图1：对虾肠孢虫病(EHP)组织病理学显现在感染的对虾上。（A&B）南美白对虾的肝脏胰组织，（C）蓝对虾。箭头代表成熟的孢子；星星代表原形体阶段。（比例=25μm.） 我们选择用来检测对虾肠孢虫病（EHP）的染色体底物包括EHP-510F(5’-GCCTGAGAGATGGCTCCCACG)和EHP-510R(5’-GCGTACTATCCCCAGAGCCCG)。用已经受感染的对虾DNA提取物实施聚合酶链反应（PCR）。结果显示这个聚合酶链反应能够检测出已受感染的对虾（图2，1-3行）；染病对虾的排泄物以及水质样本均被检测出感染对虾肠孢虫（EHP）（图2，4-5行）。同时我们也检测了另外两种寄生虫病原体：阿米巴虫和虾白肉病微孢子虫，然而这些对虾肠孢虫病（EHP）底物并没有与该两种病虫发生交叉反应（图2，6-7行）。
图4.用地高辛标记法标记的对虾肠孢虫病(EHP)探针在对连续部位进行原位杂交。深蓝色沉淀物表示对虾肠孢虫病(EHP)的出现（A）用对虾肠孢虫病(EHP)探针对南美白对虾（越南）进行原位杂交；（B）蓝对虾（文莱）；（C）斑节对虾表现出了白肉病症状（马达加斯加），插入图片（D）：使用Pereziapenaei探针的原位杂交。比例条＝25μm。 令人意外的是，我们从4/9的冷冻卤虫生物样本中检测出对虾肠孢虫病(EHP)（图2，9行，一个非常具有代表性的样本）。在这些对对虾肠孢虫病(EHP)呈阳性的样本中，18SrRNA基因被扩充和重新排列。这个被修改的序列与来自越南的对虾肠孢虫病样本有99.9%的相似，也就是说卤虫中所带有的对虾肠孢虫病(EHP)很可能源自东南亚。 对虾肠孢虫病传播的研究 以上三个生物测定均使用来自泰国的已感染对虾肠孢虫病的对虾样本。在第一个生物测定（共栖组）中，染病对虾被转移到实验缸中与用高弹体标记的无特定病原体的对虾一起生活。35天后，无特定病原体的对虾感染对虾肠孢虫病原（图3A）。在第二个生物测定（水生感染组）中，用曾饲养过染病对虾的水体转移到无特定病原体的对虾实验缸中。42天以后，无特定病原体的对虾依旧没有感染病原（图3A）。在第三个生物测定中，用染病对虾的肝胰腺喂养无特定病原体的对虾，每隔五天用聚合酶链反应（PCR）分析样本；15天后，无特定病原体的对虾感染病原（图3B）。实验结果显示，对虾肠孢虫病（EHP）可以通过嗜食同类传播。 原位杂交（ISH） 通过用地高辛标记法标记的对虾肠孢虫病进行原位杂交，染病的南美白对虾（图4A）和蓝对虾（图4B）显示微孢子（嗜碱性的内含物）存在于肝胰腺小管的上皮细胞中。实验中的探针具有非常高的识别敏锐性，在已感染虾白肉病的斑节对虾中，该探针无任何反应显示（图4C）。 结语
图2.对虾肠孢虫病聚合酶链反应（PCR）检测对虾肠孢虫病（EHP）。M:1kb以上的阶梯型分子量标准。从越南收集来的南美白对虾样本（第一行，2014年样本；第二行，2015年样本）和来自泰国（3-5行，无特定病原体对虾，排泄物和水），感染白肉病的斑节对虾（第六行），感染阿米巴虫的南美白对虾（第七行），无特定病原体的南美白对虾（第八行），卤虫生物样本（第九行），无操作对照组（第十行）。 对虾肠孢虫病(EHP)在养殖对虾中的传播可能还会继续，需要通过建立有效的方法来监控这种寄生虫的发病和传播。所以通过用敏锐的分子生物学方法去检测对虾，活饵料和虾塘环境的对虾肠孢虫病(EHP)会非常有效。感染对虾肠孢虫病(EHP）的对虾通常不能被肉眼识别，因为EHP不会呈现临床症状。本研究表明基于聚合酶链反应（PCR）和原位杂交（ISH）的检测方法和诊断步骤具有具体性和灵敏性，可作为有效的常规诊断方法去检测对虾养殖群体，池塘环境和对虾产品。
图3：聚合酶链反应生物检测1，生物检测2，以及shengwujiance3的肝胰腺样本。（A）35天后检测出共栖组存在EHP，但是不能检测到水生感染组。（B）15天后，EHP在（嗜食同类）被检测到。 相关链接： 世界顶级专家解读对虾肝肠胞虫病（EHP） 2015年10月，在加拿大举办的全球水产养殖联盟对虾专题会议上，EHP成为热点话题，对虾专家组的成员的成员也对EHP发表了各自的见解。 Expert：当孢子找到合适的对虾宿主，它就会减慢对虾的生长速度，出现大小不一的情况，在一个发病的池塘，甚至会出现5个不同规格的对虾和许多小虾。 Expert：其实EHP最早影响泰国是在2011年前，比EMS还要早，我们看到产量大概下降了10%。 Expert：对于EHP，其实有一些比较有效的预防措施。首先，最关键的就是养殖密度，养殖密度越低，感染EHP的机率也越低。比如在印度，每平方米放20个苗(1.4万/亩)的虾塘比每平方米放50个苗(3.5万/亩)的塘，能获得更好的生长速度和规格更大的虾。 第二个因素是坡度。低盐度养殖感染EHP的机率较小，高坡度会增加感染的机率。 Expert：EHP的严重程度取决于其孢子在肝胰脏中的数目：孢子的数目越多，对生长的影响越大。孢子的数目与养殖的天数成正比，养殖的天数越长，孢子数目越多，特别是在养殖40天左右，会出现一个爆发的高峰期。 Expert：一旦发生感染，没有已知的治疗方法。孢子几乎是坚不可摧的。一些业内专家认为，EHP孢子可以耐受长达50年的干燥，或200ppt的含氯消毒剂。因此，如果一个孵化场或者养殖场被感染，放养前一定要采取严厉的措施去消毒。 Expert：EHP能垂直传播，如果亲虾感染了EHP，就会传染给无节幼体和仔虾。如果某个养殖区的某些池塘感染了EHP，其孢子会随排进水系统进入未感染的池塘、孵化场。 预防对虾肠孢子虫病（EHP）的几点建议 EHP在全世界范围内传播已经是既定事实了，特别是在亚洲的中国、马来西亚、泰国、印尼和越南，已经成为重灾区，与些同时，印度和墨西哥也先后发现了EHP(详情请查看《泰国卜蜂：对虾肠孢子虫病(EPH)成为对虾业的另一威胁》)。EHP主要是感染对虾的肝胰腺从而破坏组织吸引营养的能力，从而导致生长缓慢。但是它还有一个很显著的特点，生长缓慢但不会造成大量的死亡，这点起码从心灵上获得一些安慰，养殖户不致于颗粒不收，看着长不大，马上卖掉，组织下一茬生产为妙。 虽然知道有EHP这个东西，但是它的寄主还不清楚是什么，现在也没有有效的方法处理EHP，大环境下想要完全阻断它也是不可能的事。最好的方法就是尽量减少EHP进入池塘，同时控制它在池塘里的数量水平。 据说曾经从中国进口过活饵和活虾的养殖区都发现了EHP，中国又中枪了。 诊断
EHP可以用PCR或环介导等温扩增技术(LAMP)来检测，据说也可以用光学显微镜来检测，但是需要有非常好的眼力才能看到这个小东西。如果对每一个亲虾都实行检测，这个成本就非常高了，有些污染严重的地方就基本就没有不带病源的活体，检测的结果肯定是让人沮丧的。 预防方法 有相关的人员称，其它种类的微孢子虫可以通过药物来处理，但是EHP似乎对这些药物不敏感，因为它攻击特殊的组织。所以也只能通过一些其它的策略来预防了。第一，育苗生物安全;第二，严格的清塘处理;第三，加强池塘管理。 育苗生物安全 池塘蓄养的亲虾，特别是投喂感染EHP的活饵的，感染EHP的机率会非常高，因为EHP能通过粪便传播。只要用沙蚕、蛤肉、鱿鱼和本地丰年虫饲养的亲虾，感染EHP的风险都会升高。如果必须使用活饵，建议还是经过冷冻、巴氏消毒或者X射线消毒以后再使用。 亲虾的培育池一定要清洗干净，完全干燥，然后用氢氧化钠消毒。所有的设备包括气管水管，容器都要在2.5%的氢氧化钠溶液中浸泡至少3个小时。浸泡完以后剩下的氢氧化钠溶液要冲走，不要留着它用了。经过浸泡设备要充分凉干，在使用它们之前用200ppm、PH低于4.5的盐酸喷洗处理。EHP有非常强的耐受力，想通过以上的处理方法把它完全干掉有点难度，但是我们的主要目的不是要消灭它，而是要减少它的数量水平。 清理虾卵和无节幼体：相关的育苗人员说，用适合浓度的碘或甲醛溶液能减少EHP附着于卵和无节幼的风险，同样这种方法也可以控制其它的细菌传播，比如EMS。 严格的池塘清塘处理 池塘的有机质越多，患微孢子虫的风险越高，这可能与微孢子虫的中间寄主的生活环境有关。因此在放苗前，还是建议要彻底地清塘消毒为妙。具体的做法就是彻底清淤了，还用就是用强碱性的消毒物质如氢氧化钠，生石灰等处理塘底，使池塘底部的PH达到12，这样能有效杀灭大部分的微孢子虫。 推荐了一个有效的方法：每亩地用400公斤以上的生石灰处理塘底，然后塘底要完全晒干。有条件的养殖户翻耕塘底10厘米左右，使生灰与底泥充分混合，然后加水使生石灰作用，如果操作得当，塘底的PH值能达到12，并用保持一段时间，可以有效杀灭微孢子虫。(PS.这个操作工程量相当大)。 加强池塘管理 底层淤泥清除以后，建议用一些生物制剂(如菌)去处理底质，可单独使用，也可以带水使用，主要的目的是降解底层的有机质，从而破坏EHP的生长环境，经常性合理地使用分解能力强的菌来处理有机质变得致关重要。 关于EHP检测的一些建议 光学显微镜可以用于镜检EHP，但起码用40倍的物镜，如果要确诊，那就得用100倍物镜。镜检要用肝胰脏的组织涂片或者组织切片。这是个技术活，需要相当的眼力。如果镜检的样品里的微孢子虫还不是成熟的个体，那也很难分辨了来。这种方法需要花费很多时间和精力。 因此PCR检测仍然是首选，最好选取肝胰脏的组织，如果是巢式PCR，使用对虾的粪便也可以。
【关键字】：对虾 对虾肠胞虫病 水产养殖 |
| 重点推荐 |
| |
微博互动免责声明：
1、凡本网注明“来源：水产前沿网”的所有作品，均为水产前沿网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：水产前沿网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
2、凡本网注明“来源：XXX（非水产前沿网）”的作品，均转载自其它媒体，转载目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责。
3、如本网转载涉及版权等问题，请作者在15天内来电或来函与水产前沿网联系。联系方式：020-85595682。
