全球聚焦对虾病害，谜底渐被揭开

水调歌头

全球聚焦对虾病害，谜底渐被揭开

　　从2009年下半年开始至今的对虾“偷死”病，已经困扰了业者近三年半的时间，国内外的科研人员、企业、养殖一线业者无不在为此探寻发病的根本原因，而在病害迟迟未找到答案的背景，对虾业者也在为获得养殖成功而四处奔走。
　　
　　2012年8月9日至10日，由NACA (亚太水产养殖中心)主办的，针对新兴的对虾早期死亡综合症（EMS）/急性肝胰腺坏死综合症（AHPNS）突发事件报告会议，在泰国首都曼谷召开。
　　此次咨询会议召集了全球87位参与者，包括17位国际虾病专家（来自澳大利亚、文莱、加拿大、中国、西班牙、泰国、英国、美国和越南）、40名政府官员（澳大利亚、孟加拉国、文莱、柬埔寨、中国、印尼、印度、缅甸、马来西亚、尼泊尔、巴基斯坦、菲律宾、泰国、斯里兰卡、新加坡和越南）和10位私企代表（来自奥特奇公司、拜耳公司、卡吉尔、CP、辉瑞公司、英伟、诺伟司、Pharmaq），15位国际组织官员（OIE、FAO、SEAFDEC、MPEDA、WFC、NACA）和7名泰国和越南的研究生。其中19位专家的演讲分析了疾病的爆发、发展、病理、诊断，并对该问题的应急方法做了交流分享。
　　此次会议的目的在于：
1）汇集全球知名专家、官员和生产家参与了解和讨论正在东南亚发生的对虾养殖疾病问题；
2）整合多国核心研究资源、交换信息、交流意见，更好的理解肝胰腺坏死综合症并探讨应对方法；
3）记录目前的疾病状况和各国的研究进展，吸取各国各地区在应对疾病问题上的经验教训；
4）在处理东南亚未来水产紧急疾病问题上达成共识。

什么是早期死亡综合症（EMS）/急性肝胰腺坏死综合症（AHPNS）？
　　
　　Early Mortality Syndrome早期死亡综合症（EMS）最初的描述是在养成期投苗30天内出现不寻常的高死亡率症状。该定义较为广义，除了失败的管理造成高死亡率外，一些病原例如：WSSV（白斑病毒）、YHV（黄头病毒）和弧菌等也与EMS有关。因此，针对近期在亚洲爆发的对虾养殖新疾病，用EMS来定义可能导致概念混淆。
　　自2009年来，不明对虾早期死亡疾病席卷亚洲，造成了在投苗以后30天内大规模死亡的惨剧。已经证实被感染的种类包括南美白对虾和斑节对虾，病虾表现出肝胰腺苍白和萎缩，甲壳质地松软，生长缓慢，有时打转游泳，垂死的对虾沉入池底后死亡。组织学检验后发现了对虾呈现肝胰腺坏死，因此给予了这种疾病更为确切的定义，叫“Acute Hepatopancreas Necrosis Syndrome急性肝胰腺坏死综合症（AHPNS）”。

急性肝胰腺坏死综合症（AHPNS）的案例分析（参考Don Ligntner 教授的演讲）
　　
　　这次疾病咨询会议，以未发现急性肝胰腺坏死综合症的致病因素（传染病原或毒素）而告终。美国亚历山大大学的著名对虾疾病专家Don Ligntner教授将急性肝胰腺坏死定义为原发性疾病。所谓原发性疾病，可以理解为不明原因的疾病。此外，急性肝胰腺坏死的病理还包括 1）肝胰腺B、F、R和E细胞功能障碍，肝胰腺从中部向四周坏死； 2）肝胰腺细胞核变大，细胞脱落后进入肝胰腺小管腔； 3）最后，血细胞发炎并伴随着弧菌的感染。 在池塘养殖过程中，大家通常使用肉眼观察来鉴定。对此，Ligntner教授也给出了以肉眼观察来诊断疾病的方法：1）病变的肝胰腺结缔组织色素缺失导致白化；2）肝胰腺显著萎缩；3）对虾甲壳质地松软，有时出现空肠现象；4）有时可以在肝胰腺中发现黑斑或黑条纹；5）用拇指和食指很难碾碎肝胰腺；6）严重的情况下，对虾可在投苗10天左右开始死亡；7）垂死状态的对虾可能沉入池底。
　　
AHPNS疾病历史和传播区域 （参考 Disease Adversary）
　　
　　大约在2009年，AHPNS就开始在中国南部养殖区域扩散并造成很大的损失。2010年，该疾病爆发范围在中国扩大，越南也开始报道了这种问题。2011年，疾病扩散到马来西亚；2012年初，在泰国发现了AHPNS。
　　
中国
　　早期死亡综合症最早于2009年在海南发现，常常被误认为“偷死”，当时，很多养殖户未引起重视。直至2011年，中国大陆地区的疾病问题才愈发突出。调查报告显示，5龄以上的池塘和盐度高于20ppt的近海区的病害情况尤为严重（Panakorn, S., 2012）。2011年上半年，海南、福建、广东和广西部分地区的死亡损失高达80%。
　　
马来西亚
　　马来西亚的南美白对虾早期死亡综合症在2010年中期曾有报道，主要疾病发生在彭亨州和柔佛州，当时还没有对该疾病命名。2010年，马来西亚约有11万吨的南美白对虾和斑节对虾产量，但2011年统计结果显示，总产量下降至4.5万吨。2012年1月至5月，总产量仅有2.5万吨（数据来源：Malaysia Shrimp Industry Association）。早期死亡综合症使马来西亚的南美白对虾产量由2010年的8.7万吨减产至6.7万吨（数据来源： Annual Fisheries statistics）。而2012年上半年的2.5万吨产量更是出乎大家的意料！马来西亚的研究人员曾怀疑AHPNS与水质污染和麻痹性贝类毒素有关，但这个假设需要更多的实验和调查予以佐证。
　　
越南
　　2010年，越南的湄公河三角洲地区发现了该疾病，直到2011年3月，早期死亡综合症被确立并相继报道时，疾病问题已经泛滥（Mooney, 2012）。越南的田刚，坚江，槟知，朔庄，薄寮和金瓯等省份的总计9.8万公顷养殖面积受到该疾病的影响。2011年6月，斑节对虾养殖业遭受空前的损失，其中茶荣省6200公顷养殖面积遭受毁灭性打击，死亡的对虾总数约为3.3亿尾，直接经济损失120亿越盾（合计约380万人民币）；朔庄省2万公顷养殖面积受灾，经济损失1.5万亿越盾（约4.7亿人民币）（Mooney, 2012）。2012年1月至3月，AHPNS依然影响着湄公河三角洲和中南部沿海地区的对虾养殖，在越南团队的疾病报告中估计，2012年全年受AHPNS严重影响的面积将在3.9万公顷左右。
　　
泰国
　　至今为止，泰国大约0.7%的养殖池塘受到EMS的影响，主要分布在东部沿海地区（罗勇，尖竹汶，达叻府，北柳府省）。虽然影响面积不大，但泰国政府、研究人员和对虾养殖协会正在努力开展合作，以减轻疾病带来的困扰。
　　
寻找致病原因 （参考Tim Flegel教授的演讲）
　　
　　从AHPNS在亚洲，尤其是东南亚的扩散情况上看，导致AHPNS蔓延的很可能是一种病原生物。但是目前为止，从越南和中国收集的对虾样本的组织虑液在人工感染试验中无法证实该疾病是由病毒引起的。AHPNS的组织病理学显示该疾病症状很可能是中毒，但是在实验室条件下投喂越南提供的样本饲料和测试菊酯（甲壳动物杀虫剂）的实验得出的结论依然无法证实之前的假设。PCR测试结果显示，AHPNS与WSSV（白斑综合症病毒）、THV（黄头病毒）、IMNV（传染性肌肉坏死病毒）和TSV（桃拉综合症病毒）无关。
　　尽管导致AHPNS的原因没有得到确定，但针对疾病的病原和毒素研究不可中断。研究调查需要专注于解决这方面的知识空白，探索调查所有可能的原因。
　　
探索的途径包括：
1. 生物性和非生物性的毒素：
1）从水质、土壤和底质中探索；
2）从饲料和饲料成分，微生态制剂成分中探索；
3）从养殖中使用的新老药品中探索；
2. 新型细菌研究：
1）应用shotgun sequencing（鸟枪法测序）细菌的rRNA；
2）噬菌体细菌的相关研究入手；
3. 新未知病毒探索：
1）同时测试组织过滤和未过滤提取物来确定是否存在病毒的可筛选性；
2）通过TEM方法检测病虾组织中的病毒粒；
3）鸟枪测序法检测“病毒提取物”。　
　　Ligntner 教授于今年的7月底和8月初调查了越南几个地区的对虾养殖场。“几乎所有的养殖场都出现了AHPNS问题，但是没有一个有效的缓解措施，一个看似有效的应激措施在另一个地方尝试后不能得到理想中的效果”，教授表示，他和他的研究团队将在今年的九月或者十月重新准备一份演讲报告，这份报告将揭示AHPNS的原因及影响；提供面对该疾病时，在种苗场和养殖场两方面的有效处理措施，以帮助养殖户避免和降低疾病损失。（摘抄自《Global Aquaculture Alliance》）

专家演讲的个人浅析
　　
　　针对在亚洲的突发对虾疾病，全球知名专家汇聚于曼谷，从不同的角度剖析了AHPNS。虽然最终的原因没有得到确立，但在会议上众多专家达成了诸多共识，同时国际最新的水产疾病分子检测技术也在会议上亮相。
　　1）早在2012年初，Ligntner教授就在GAA杂志上发表了早期综合症病理研究报告。此次会议上，Ligntner教授的演讲内容与之前发表的病理报告大体相同。Ligntner教授描述了组织病理特征，首先确立了弧菌继发感染的观点，即弧菌感染是发生在对虾肝胰腺出现病变坏死之后。这个观点得到了专家的广泛认同。虽然病理学显示AHPNS很大程度上是一种生理中毒，但是实验测试了由越南提供的样品饲料和一种甲壳动物杀虫剂（菊酯），结果显示样品饲料和菊酯均不是造成AHPNS的罪魁祸首。
　　2）Tim Flegel 教授针对AHPNS与细菌或病毒有关的问题做了详细解释。通过PCR测试，已经排除了WSSV、YHV、IMNV和TSV造成AHPNS的可能性。在报告中，Flegel 教授对EMS和AHPNS这两个概念之间的差异进行了解释，并得到广泛认同。Flegel 教授指出了对虾样品收集和检测时常出现的误区并予以纠正，同时介绍了shotgun sequencing（鸟枪法测序）在对虾疾病检测上的应用。
　　3）对于新疾病的发生和扩散，生态学家Peter Walker教授认为主要原因是某些传染因素扰乱了生态系统。Walker教授以在中国发生的SARS和基孔肯雅热症为例子做了精彩的开场白，他认为在正常条件下，致病的病原是存在的但不致病；生态系统平衡被打乱了以后这些疾病才会感染健康的生物。对虾疾病的爆发，是因为对虾养殖在高密度非自然的水环境中，同时对虾常常受到来自外界的应激，鲜活生物交易运输则辅助了疾病的扩散。
　　4）泰国Chalor Limsuwan 教授在他的演讲中强调了微生态制剂和AHPNS的关系，调查中指出，马来西亚和泰国发现EMS的池塘，100%为前期水质处理使用了微生态制剂；而在养殖全过程未使用微生态制剂的生物絮养殖模式池塘，没有发现EMS。这些微生物（乳酸菌、酵母菌）产生的酸性物质导致对虾脱壳异常，间接导致软壳和肌肉白浊。为了预防EMS，Chalor教授推荐养殖户购买PL10以上的种苗（PL10指post larvae期第10天），同时减少养殖前期使用微生态制剂调水，总碱度保持在100 mg/L以上，溶解氧保持在4 mg/L以上。
　　5）越南是AHPNS的重灾区之一，有人曾怀疑菊酯是造成AHPNS的凶手。菊酯的作用是消除养殖前期的白斑载体，在越南广泛使用。但有反例证明，一些使用了菊酯的池塘没有出现AHPNS，另外一些没有使用菊酯的池塘AHPNS问题严重； Ligntner教授则通过实验证实了菊酯与AHPNS无关。此外，藻毒素也曾被列入怀疑名单，但是没有证据证实藻毒素与AHPNS有直接关系。

　　从会议内容来看，几个主要对虾养殖国家的专家就各自近几年遇到的情况分享了他们的研究成果，而在这之前，国内对于虾病的讨论也非常多，业者对于探寻病害的原因从来没有像这几年这样强烈！

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国内探寻虾病病因历程：
2009年-2010年
　　2009年下半年偷死病刚开始，2010华南虾苗全线发病，对此，中国水产频道论坛率先就这一话题发起讨论。
　　“以湛江地区为例，南美白对虾苗发病排塘超过7成，症状基本上是不吃东西，空胃，肠道红，腮肿，死虾都在水底但是水面看不到，一般发病期在放苗后的40天内，而且不管是哪个厂家的苗都有发病的现象。”
>>相关链接：2010华南虾苗全线发病，谁知道发病原因？ http://www.fishfirst.cn/thread-493-1-1.html

2011年
　　在湛江举行的第三届中国对虾产业发展论坛上，国家虾产业技术体系首席科学家何建国教授表示何建国讲道，2010年的对虾病害基本呈现几个事实：第一，4-6月份发病排塘比较厉害；第二，与二代苗相比，进口的一代苗机率高很多，呈现死亡明显提前，速度快的特点；第三，在养殖塘特别是水较肥的虾塘，蓝藻和甲藻成为优势种，导致虾发病死亡更快。
　　对于盛行的虾病由病毒所致的说法，国家海洋局第三海洋研究所杨丰研究员就其所做研究坦言，从福建养殖区域取样分析，在电镜水平下没有发现病毒颗粒。
　　对此，何建国认为病害跟环境包括一些可能的投入品有关，“到目前为止，我们只发现在大量死亡虾体中存在一种叫做‘螺原体’的微生物”。他提到，这种生物在1996年的时候就在美国地区养殖的斑节对虾中发现，它可以进入到细胞内破坏细胞，导致肝脏萎缩，但何建国认为这并不是主要的致病因子。
　　同样一直致力于病毒防控的黄海水产研究黄倢研究员在交流中谈到，他对广西北海采集的样品进行微生物分离时，分离出了两种细菌，其中一种是副溶血弧菌，“但在一般情况下，弧菌不会引起像2010年那么大规模的病害。”对此，杨丰也予以认同。
>>相关链接：对虾业这一年 http://www.fishfirst.cn/article-1927-1.html）
　　与此同时，《水产前沿》杂志及中国水产频道发就以养虾模式应对虾病的思路发起了《寻找全球最成功的养虾模式》专题，并征集了各个主产区的主要养殖模式。
>>相关链接：寻找全球最成功的养虾模式，Let's go!  http://www.fishfirst.cn/item/zt/20110730/index.html）
　　另外，部分业者也开始分享他们应对的方法和心得，通过网终平台和其他媒体与其他同行一同探寻虾病的原因及养殖模式。
>>相关链接：“國家的蝦農 ”线上分享养虾成功秘诀 http://www.fishfirst.cn/thread-7255-1-3.html
>>我是这样对付偷死的 http://www.fishfirst.cn/thread-14066-1-9.html

2012年
　　今年开春，虾农依然笼罩在虾病的阴影中，为此，中国水产频道论坛力邀一线实力养殖技术高手进行在线交流，以“虾病肆虐，2012对虾怎么养”的主题探讨，给众多业者出谋划策。
>>相关链接：【在线交流】虾病肆虐 2012对虾怎么养@海上积雨云、匪兵从良、anmin联手在线交流 http://www.fishfirst.cn/thread-11570-1-3.html）
　　多位业者也在网络上分享了有关分析和对付虾病的国内外文章。
>>相关链接：
【分享压箱资料】大陆地区虾病的发生与处理方法
http://www.fishfirst.cn/thread-12907-1-2.html

再次分享压箱底资料----建立抗病之生态系统——虾病防治现场务实
http://www.fishfirst.cn/thread-14346-1-4.html

再次分享压箱底资料——虾病处理新概念！！
http://www.fishfirst.cn/thread-14345-1-2.html

好文章：有效控制白斑综合症病毒之七步法
http://www.fishfirst.cn/thread-15816-1-6.html

亚太地区南美白对虾早期死亡综合症（急性肝胰腺坏死综合症）病害报告综述
http://www.fishfirst.cn/thread-14262-1-6.html

　　而在今年第四届中国对虾产业发展论坛上，众多业者再次将目光聚集到如何解决虾病和探寻病因上。何建国教授表示，“早期综合症，暴死病，与倒藻有关，我也比较认同”。至于偷死病，病因暂时没有确切的结论。
　　何建国透露，“在对虾中发现一种神经坏死病毒，也做过相关实验，有致病性，但致病性不强，还不能下结论。”他认为第二个可能的因素是细菌病。第三，他认为也不排除跟对虾的遗传性有关，包括个体差异导致抗病性差等。
　　论坛互动环节中，来自海南大学的赖秋明教授认为，可能是藻毒素和弧菌的问题。同时对目前的虾病也采取了一些措施，一是针对培养藻类过程中注意所在海区水源的氯磷比，二是推广一种保底方式，施肥时加磷肥不加氮肥。但具体是什么导致对虾偷死病，暂时还没有结论。

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　　2012年8月9日至10日，由NACA (亚太水产养殖中心)主办的，针对新兴的对虾早期死亡综合症（EMS）/急性肝胰腺坏死综合症（AHPNS）突发事件报告会议中国外知名专家的技术演讲和各国代表的演讲。PPT在后面奉上。
　　
1） Characterization, Distribution, Impacts and Case Definition 《急性肝胰腺坏死综合症的特征、分布、影响以及案例分析》   演讲者：Don Lightner 教授
2）Research Progress on Bacterial and Viral Causes of AHPNS 《急性肝胰腺坏死综合症的细菌和病毒研究进展》   演讲者：Tim Flegel 教授
3） Disease Emergence –Why and How  《疾病的发生，为什么？怎么样？》  演讲者 Peter Walker 教授
4） Novel Methods for “Hunting for Ghost Viruses” 《寻找“幽灵病毒”的新方法》  演讲者： Jeff Cowley 博士
5） Epidemiology and Risk Factors-What We Know? 《流行病学和危险因素，我们所知道的是什么？》  演讲者： Flavio Corsin 博士
6） Is EMS a Management Problem？ 《早期死亡症状是养殖管理问题吗？》  演讲者：Matt Briggs 博士
7） One Month Mortality Syndrome-Revisiting an old story  《一个月死亡症状-重温一个老故事》  演讲者： Celia Pitogo 博士
8） Management of EMS-What Works and What Does Not?  《早期死亡综合症的管理-什么有效，什么无效?》  演讲者： Chalor Limsuwan 教授
9） Disease Preparedness-Theory and Practice. What Have We Learnt? 《疾病防备的理论和实践，我们吸取了什么教训？》   演讲者：Ingo Ernst 博士
10） 中国、越南、泰国和马来西亚 代表团队的演说

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下面奉上这次会议的主要演讲PPT

1）Characterization, Distribution, Impacts and Case Definition
《急性肝胰腺坏死综合症的特征、分布、影响以及案例分析》   

演讲者：Don Lightner 教授

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2）Research Progress on Bacterial and Viral Causes of AHPNS
《急性肝胰腺坏死综合症的细菌和病毒研究进展》   

演讲者：Tim Flegel 教授

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3）Disease Emergence –Why and How  
《疾病的发生，为什么？怎么样？》  

演讲者: Peter Walker 教授

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4）Novel Methods for “Hunting for Ghost Viruses”
《寻找“幽灵病毒”的新方法》  

演讲者： Jeff Cowley 博士

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5） Epidemiology and Risk Factors-What We Know? 《流行病学和危险因素，我们所知道的是什么？》  

演讲者： Flavio Corsin 博士

在2010年12月刊，《水产前沿》杂志亦对Flavio Corsin 博士有过专访，相关内容可以查阅。

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6） Is EMS a Management Problem？
《早期死亡症状是养殖管理问题吗？》  

演讲者：Matt Briggs 博士

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7）One Month Mortality Syndrome-Revisiting an old story  
《一个月死亡症状-重温一个老故事》  

演讲者： Celia Pitogo 博士

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