西伯利亚鲟（♀）×史氏鲟（♂）反季节人工繁殖试验

李达付

西伯利亚鲟♀×史氏鲟♂

反季节人工繁殖试验

2009级水产养殖学专业  李达付　

（西昌学院动物科学学院，四川 西昌  615013）

【摘  要】通过对温度的调控，使（7-9）龄西伯利亚鲟雌鱼和7龄史氏鲟雄鱼性腺在非繁殖季节发育成熟。在15.8℃条件下利用LRH-A2+DOM催产亲鱼，采用一针法催产雄鱼，获得精液后再用二针法（针间距12h）催产雌鱼，催产剂量为雄鱼的2倍，催产效应时间为24-42h。对催产后的亲鱼人工挤卵、采精和人工授精，采用滑石粉使受精脱粘，然后放入孵化瓶内流水孵化。第一次催产雌鱼9尾，其中3尾产卵，共获成熟鱼卵165000粒，获受精卵96000粒，获水花鱼苗54000尾，催产率33.33％、受精率58.18％、孵化率56.25％。一个月后第二次催产雌鱼8尾，其中6尾产卵，共获成熟鱼卵258000粒，获受精卵120000粒，获水花鱼苗58000尾，催产率75％、受精率46.51％、孵化率48.33％。

【关键词】西伯利亚鲟  史氏鲟  反季节  杂交  人工繁殖

    杂交优势种往往具有病害少、生长快、肉质优等特点，西伯利亚鲟（♀）×史氏鲟（♂）（下文简称反杂交）具有上述特点，是有养殖前景的新品种。反杂交成鱼价格合理，市场前景好，市场需求量大。反杂交后代生长快，个体大，成熟度系数最高可达15％，因此是适合黑鱼子酱加工的品种。反杂交对环境适应能力强，适合引种到多地进行养殖。山东泗水县虹鳟鱼良种场对史氏鲟♀×西伯利亚鲟♂（下称两杂交）、小体鲟♀×史氏鲟♂（下称小杂交）、史氏鲟♀×国外杂交鲟♂（下称三杂交）、史氏鲟♀×俄罗斯鲟♂（下称俄罗斯杂交）、西伯利亚鲟♀×史氏鲟♂（下称反杂交）、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂（下称大杂交），进行了网箱养殖对比试验，通过综合分析后，得出几种杂交鲟的网箱养殖优劣顺序为:两杂交＞反杂交＞大杂交＞小杂交＞俄罗斯杂交＞三杂交。其中反杂交具有生长速度快、养殖成活率高、受病害影响小、销售情况好、运输成活率高等优点[1]。

目前尚未见西伯利亚鲟（♀）×史氏鲟（♂）人工繁殖的报道，而对西伯利亚鲟纯种人工繁殖和史氏鲟纯种人工繁殖的报道也较少，罗刚和曲秋芝等研究并报道了西伯利亚鲟的人工繁殖[2-3]，张修键和刘键等研究并报道了史氏鲟人工繁殖[4-5]。鲟形目鱼类反季节人工繁殖的报道也很少，潘伟志和周风剑等研究并报道了史氏鲟反季节人工繁殖[6-7]。鲟形目鱼类人工繁殖的相关书籍较多，有谢忠明主编的鲟鱼养殖技术[8]；刘家寿和胡传林编著的鲟鱼适用养殖技术[9]；四川省长江水产资源调查组编著的长江鲟鱼类生物学及人工繁殖研究[10]；曹克驹主编的名特水产动物养殖学[11] 。本试验主要为西伯利亚鲟（♀）×史氏鲟（♂）的繁殖生物学积累资料，为西伯利亚鲟（♀）×史氏鲟（♂）的繁殖生产提供数据参考，此次试验可为同仁在做西伯利亚鲟（♀）×史氏鲟（♂）研究时提供参考资料。

李达付

1 材料与方法
1.1 试验时间与地点
    试验分为两次进行，第一次试验时间为2012年11月30日至2012年12月11日，第二次试验时间为至2012年12月27日至2013年1月7日。在四川涌泉珍稀鱼养殖有限公司广汉基地进行亲鱼前期培育，在峨眉山脚下高桥镇清音冷水鱼处进行亲鱼冬驯培育，在四川涌泉珍稀鱼养殖有限公司峨眉基地暂养后进行催产试验，并在四川涌泉珍稀鱼养殖有限公司峨眉基地进行受精卵孵化。
1.2 试验材料
1.2.1 试验亲鱼
    试验动物为西伯利亚鲟（♀）和史氏鲟（♂），由攀枝花跨越水产养殖有限公司和彭州涌泉冷水渔业有限公司提供。第一次试验选择雌鱼9尾，其中7号亲鱼为9龄，其余为7龄，第二次试验选择雌鱼8尾，所有亲鱼均为7龄。两次试验用亲鱼体重均为6-10kg。
1.2.2 试验器材
　　　显微镜、洪腾条码器、孵化瓶、手术刀、手术钳、直尺、电子秤、伤口缝合针、注射器、取卵器、亲鱼培育池、催产池、暂养池、鱼苗培育池等。
　　　孵化瓶高55cm，孵化瓶直径13cm，底部有一半径为6.5cm的半球形凹槽，底部凹槽内架设进水管，进水管与三块互成120º的支撑片连接。支撑片与进水管连接处，支撑片沿管口下沿0.8cm，保证进水管的管口与凹槽的底部之间有一定的空隙，瓶的上部离顶5cm处有一开口，开口在瓶外连有一段细管，细管导水入一导流管，导流管连接一大的暂养盆。
　　　洪腾条码器为亲鱼编号用。
　　　清音冷水鱼处的亲鱼培育池为八边形，长边长14m，短边长2m，小边1.41m，水深1.2m。四川涌泉珍惜鱼养殖有限公司峨眉基地的亲鱼暂养池也为八边形，正边长2m，角边长1.41m，水深0.5m。催产池也为八边形，长边长2.5m，角边长0.4m，水深0.5m。
　　　鱼苗暂养池为圆柱形盆，半径为1m，高60cm，圆心处有一10cm的孔，孔上插水管以控制盆内水位。管用外连网衣的焊接钢架笼隔离，另外钢架网衣笼与盆的底部连接处用海绵连接。
1.2.3 试验用水
    亲鱼培育阶段，各个基地的用水如下：四川涌泉珍稀鱼养殖有限公司广汉基地的用水为涌泉水与地下水的混合地下水；清音冷水鱼处的用水为河流水；亲鱼暂养、受精卵的孵化和鱼苗暂养用水，为四川涌泉珍稀鱼养殖有限公司峨眉基地的地下暗河水。
1.3 试验方法
1.3.1 亲鱼培育
　　　2013年3月至2012年10月，将符合标准的繁殖用亲鱼，在四川涌泉珍稀鱼养殖有限公司广汉基地进行前期培育。2012年10月26日（此时广汉基地水温降至17℃左右）将繁殖用亲鱼移到峨眉山脚下高桥镇清音冷水鱼处进行冬驯培育1个月，冬驯水温8-10℃。2012年11月26日，从冬驯的亲鱼中挑选出成熟度较好的9尾亲鱼运往四川涌泉珍稀鱼养殖有限公司峨眉基地暂养，等待催产。
　　　整个亲鱼培育阶段选用凤凰牌3.0鲟鱼料培育。前期培育按亲鱼体重的1.5％投喂，保证亲鱼的怀卵量。冬驯培育投喂量控制在亲鱼体重的0.5％左右。亲鱼在四川涌泉珍稀鱼养殖有限公司峨眉基地暂养期间停止投喂。
1.3.2 雌雄鉴别与成熟度鉴定
　　　雄鱼体表光滑，腹部较小，腹部较硬，性成熟的雄鱼，用手轻压生殖孔，有少许精液流出。
　　　雌鱼体表粗糙，腹部柔软且膨大。成熟雌鱼腹部膨大，腹壁变薄，隐约可见腹腔的卵巢，腹部呈青瘀色，腹壁可见血管分布。
1.3.3 亲鱼催产
　　　雌雄亲鱼催产池分开，雄鱼每池放2尾，雌鱼每池暂养4尾，催产池中流量控制为1.2L/s。
　　　雄鱼催产在雌鱼催产前进行，用宁波第二激素厂生产的促黄体激素释放激素类似物2号（LRH-A2）+马来酸地欧酮（DOM）催产，采用一针法，注射剂量视亲鱼性成熟状况。催产后，若雄鱼表现出露背顶流逆水环游现象，则立即采集精液，并取样在显微镜下观察精细胞的活力。第一次试验催产一尾雄鱼并成功搜集到优质精液。第二次试验共催产两尾雄鱼，第一尾雄鱼催产效果较差，于是进行了第二尾雄鱼的催产，成功搜集到优质精液。
　　搜集到强活力的精液后，即催产雌鱼。雌鱼催产药物用LRH-A2+DOM，成熟度较好的亲鱼采用两针法催产，针间隔12h。成熟度较差的亲鱼采用3针法催产，两次针间隔也为12h。2012年12月1日进行第一次试验，催产9尾雌性亲鱼（1-9号亲鱼），2012年12月27日进行第二次试验，催产8尾雌性亲鱼（10-17号亲鱼）。
1.3.4 精液的采集与保存及成熟卵的采集
　　　将雄鱼保定，利用一端管口磨去菱角的管径为5mm大小的软塑料管探入雄鱼生殖孔4cm左右，塑料管的另一端接入专用的储存精液的塑料袋，雄鱼自行排精。对采集到的精液进行镜检，对活力差的精液弃之不用，对活力好的精液进行保存。精液的保存采用了两种办法，一种方法是4℃冰箱内低温保存。另外一种保存方法，置于干燥避光处常温保存。两种保存方法的精液都装在特定的塑料袋内，袋内充氧，在保存过程中，塑料袋内的氧气每24h换一次。
　　　在雌性亲鱼暂养池外紧贴外壁放一用钢丝固定边缘的80×80 cm²的密网片，当发现网片上散落有鱼卵便可对暂养池内亲鱼进行检查并采卵。
　　　为了尽可能的采尽鲟鱼腹腔内的成熟鱼卵，采用腹部底端创口采卵法。采卵过程中保持雌性亲鱼体表干燥。用生理盐水清洗雌鱼的腹腔两次，把粘附在腹腔壁上的鱼卵洗出。采完鱼卵后，用手术钳将被挤出的卵巢组织送回腹腔，然后对采卵创口进行缝合。最后，给予采卵后的亲鱼注射盐酸庆大霉素。整个过程在10分钟以内完成。
1.3.5 鱼卵受精与脱粘
    以半干法受精3min，每10000粒成熟鱼卵用5ml精液，受精前需用显微镜检查精细胞活力。完成受精后，用清水清洗受精卵2次。鱼卵受精后5min产生粘性，大约在受精后15min粘性最强。用过400目筛娟网的20％的滑石粉脱粘40min-60min，脱粘40min后用网片检查鱼卵的脱粘情况，若粘性仍然较强，再继续脱粘，直至粘性不强。
1.3.6 受精卵的孵化
　　　受精卵经脱粘后在孵化瓶内孵化，孵化密度以每个孵化瓶40000粒鱼卵，到后期时，把孵化密度减小到每个孵化瓶20000鱼卵。孵化用水的水量控制在水流带动孵化瓶内受精卵上下来回翻动为好，孵化过程中用一根塑料管利用虹吸法将上层的各种坏卵吸出。孵化管理过程中，及时分瓶。对入瓶后出现粘瓶现象的鱼卵，用羽毛将粘在瓶壁上的鱼卵扫落下来，让其翻动孵化。加强巡视以防止满水跑卵，防止进水管堵塞造成孵化瓶内鱼卵缺氧死亡。
1.3.7 数据统计
催产率=产卵雌鱼尾数/催产雌鱼尾数×100％[12] …………①
受精率=受精卵数/总卵数×100％………………………….②
孵化率=初孵仔鱼数/受精卵数×100％…………………….③
畸形率=畸形仔鱼数/初孵仔鱼数×100％………………….④
相对繁殖力=怀卵量/鱼体重（g）[13] ………………………⑤
    催产率、受精卵、孵化率、畸形率和相对繁殖力分别用公式①、②、③、④和⑤计算。

李达付

2 结果与分析
2.1 催产情况
　　　第一次试验1号亲鱼成熟度较好，采用的是2针法催产，其余8尾亲鱼成熟度较差，采用的是3针法催产。其中顺产3尾，催产率33.33%。详见表1
　　表1 第一次试验催产情况
亲鱼编号        1        2        3        4        5        6        7        8        9
亲鱼体重（kg）        6        9        7        10        9        7        6        9        8
效应时间（h）        24        7.5        12.5        未产        未产        未产        未产        未产        未产
产卵量(万粒)        4.5        7        5                                               
相对繁殖力（粒/g）        7.5        7.78        7.14                                               
　　　第二次催产全部采用2针法催产。其中顺产6尾，催产率75%。详见表2
　　表2 第二次试验催产情况
亲鱼编号        10        11        12        13        14        15        16        17
亲鱼体重（kg）        9        8        6        9        8        6        10        9
效应时间（h）        29.72        31.42        34        　36        38          42        未产        未产
产卵量(万粒)        8        3.6        2.6        7                4.6               
相对繁殖力（粒/g）        8.89        4.5        4.33        7.78                7.67               
　　　综合对比表1和表2中数据，第一次催产试验的催产率（33.33%）明显低于第二次催产试验（75%），两次试验雌性亲鱼的相对繁殖力差异较大，且两次试验效应时间差异较大。第一次催产试验的亲鱼冬驯时间为一个月，亲鱼性腺发育的同步性较低，故催产率较低。第二次催产试验的亲鱼冬驯时间为2个月，亲鱼性腺发育的同步性较高，故催产率较高。由此可见冬驯在亲鱼培育过程中的必要性。第一次试验雌性亲鱼的相对繁殖力差异小，亲鱼前期培育较好，故冬驯一个月便达到催产亲鱼的选择标准。第二次试验雌性亲鱼的相对繁殖力差异大，亲鱼前期培育不理想，故冬驯2个月才达到催产亲鱼的选择标准。由此可见亲鱼前期培育的好坏会影响亲鱼冬驯的时间。第一次催产试验的雌性亲鱼性腺发育较好，效应时间较短。第二次催产试验的雌性亲鱼性腺发育较差，效应时间较长。三针法催产的亲鱼，先低剂量催熟后，再高剂量催产。其中用3针法催产成功的2号和3号亲鱼的效应时间分别7.5h和12.5h，相对于2针法催产的效应时间明显缩短，说明3针法可以很好的催熟亲鱼，有利于催产。
2.2 受精、孵化情况
　　　其中14号亲鱼为彭州涌泉冷水渔业有限公司所有，除催产率参与结果统计外，其余数据均未参与统计。详见表3
表3 鱼卵受精情况与受精卵孵化情况
亲鱼编号        产卵量（万粒）        受精卵量（万粒）        受精率        出苗量（万尾）        孵化率
1        4.5        3.8        84.44%        2.17        57.11%
2        7        5.8        82.86%        　　　　3.23        55.69%
3        5        0                       
10        8        6        75%        3.2        53.33%
11        3.6        2.5        69.44%        1.3        52%
12        2.6        1        38.46%        0.4        40%
13        7        2        28.57%        0.8        40%
15        4.6        0.5        10.87%        0.1        20%
表4 两次试验的平均数据
        催产亲鱼总数（尾）        顺产（尾）        催产率        成熟鱼卵总数（万粒）        受精卵数（万粒）        受精率        出苗数（万尾）        孵化率
第一次试验        9        3        33.33%        16.5        9.6        58.18%        5.3        55.21%
第二次试验        8        6        75%        　25.8        12        46.51% 46.51% 46.51%        5.8        48.33%
　　　结合表1、表2和表3可知效应时间的长短影响鱼苗的受精率和孵化率，效应时间越短，受精率和孵化率越高，反之则受精率和孵化率越低。效应时间主要受雌性亲鱼的成熟度影响，说明催产试验亲鱼的性腺发育不良。孵化水温15.8℃，119.25h开始破膜出苗，119.75h开始大量出苗。在以往的生产中，在同样的孵化条件下，均未出现过各项指标偏低的现象。
2.3 畸形苗
　　　观测到的畸形苗分头部畸形、脊柱畸形、鳍畸形3种类型。
　　　头部畸形分为额前缺刻（图1）、吻端侧偏（图2）、双头（图3）、单眼（图4）和无眼（图5）5种。
        
　  图1 额前缺刻                  图2 头部侧偏                图3 双头鱼
   
    图4 单眼鱼                  图5 无眼鱼
　　　鳍畸形分为单胸鳍（图6）、尾柄下弯（图7）、尾柄上翘（图8）和无尾（图9）4种。
        
   图6 单胸鳍                    图7 尾柄下弯              图8 尾柄上翘

　　图9 无尾鳍
　　　脊柱畸形分为脊柱弓形（图10）、折叠弯曲（图11）、盘蛇形弯曲（图12）、脊柱w形（图13）、脊柱s形（图14）、Ω形弯曲（图15）和△弯曲（图16）共7种。
         
图10 脊柱弓形弯曲            图11 脊柱折叠形弯曲          图12 脊柱盘蛇状弯曲
         
图13 脊柱w形弯曲             图14 脊柱s形弯曲           图15 脊柱Ω形弯曲
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　         （凹凸形弯曲)

  图16 △弯曲
　　　畸形率未做详细统计，第一次试验的畸形苗大约为1.4万尾，第二次试验的畸形苗大约为1.3万尾，第一次试验畸形率为25.93％，第二次试验畸形率为22.41％。
3 小结与讨论
3.1 各项指标偏低原因分析
　　　试验过程中的亲鱼按培育方案培育后，亲鱼的性腺能够发育成熟，并且能够成功催产、受精以及孵化，证明了方案的可行性。试验中的催产率、受精率和孵化率均较低，主要是由于在亲鱼培育操作中，前期培育不理想，且冬驯培育不规范。由于前期选出最好的亲鱼在彭州涌泉冷水渔业有限公司冬驯过程中遭遇泥石流自然灾害，全部死亡。在四川涌泉珍稀鱼养殖有限公司试验的亲鱼为较次的一批亲鱼，亲鱼的性腺发育不好。在选择冬驯亲鱼时，没有严格的制定选择标准，只有当亲鱼的性腺发育到一定的时期时进行冬驯，才能获得优质的鱼卵。冬驯前的培育主要为亲鱼积累营养物质，若营养物质积累不足，亲鱼缺乏向卵巢转化的营养物质，后期冬驯不能保证鱼卵的质量。另外亲鱼冬驯的时间不够，根据四川涌泉珍稀鱼养殖有限公司的经验，亲鱼的冬驯时间在50d以上较好，且经过冬驯后的亲鱼性腺发育的时期较为一致，有利于批量催产。冬驯的主要目的是让亲鱼培育前期积累的营养物质向卵巢转化，促进亲鱼性腺发育成熟。冬驯时间不足，营养向卵巢转化不够，鱼卵质量较差。另外本试验为种间杂交，受精过程有种间特异性，即卵子可以识别同源精子与异源精子，与同源精子结合，异源精子将受到严格限制[14]。故此试验结果受精率较低。
3.2 畸形苗原因讨论
　　　亲鱼的质量影响到鱼卵质量，鱼卵质量直接关系到鱼卵的受精率、受精卵的孵化率以及畸形率，引发的畸形主要为头部畸形、缺鳍和脊柱畸形等。引发畸形的原因较多，包括遗传、环境和营养等[15]。本试验全程为暗河水孵化，峨眉基地水源各项指标正常，以往年度的生产中未发生高畸形率现象。本次试验过程中从未使用药物，所以致畸的主要原因可能来自于营养。同各项指标偏低的原因，亲鱼前期培育不良，另外冬驯时间不足，两因素共同导致了畸形苗的发生。
3.3 与亲本纯种人工繁殖比较
     已报道的亲本纯种人工繁殖较少，具有原始数据的报道，就只有曲高芝和高艳丽的西伯利亚鲟的人工繁殖。曲高芝和高艳丽进行了两组人工繁殖试验，iv组为13-14 ℃冬驯后的人工繁殖试验，另外一组为7-8℃冬驯后的人工繁殖试验。本人试验与曲高芝和高艳丽7-8℃冬驯后的人工繁殖试验均为低温冬驯催产试验，两次试验具有可比性。曲高芝和高艳丽7-8℃冬驯后的人工繁殖试验组催产雌鱼4尾，其中3尾产卵，催产率75℅，平均受精率92.47℅，平均孵化率66.27℅。而本人两次试验的平均数据为：催产率52.94℅，受精率48.73℅，孵化率39.77℅。对两数据进行比较可知，本人的试验各项数据指标都明显低于曲高芝和高艳丽的西伯利亚鲟的人工繁殖试验。原因可能来自于两个方面，一是本人的试验为反季节人工繁殖试验，试验亲鱼性腺发育状况不理想，另外就是本人的试验为种间杂交试验，而曲高芝和高艳丽的试验为西伯利亚鲟纯种的人工繁殖试验。
3.4 小结
　　　试验过程中的亲鱼按培育方案培育后，亲鱼的性腺能够发育成熟，并且能够成功催产、受精以及孵化，证明了方案的可行性。试验中的催产率、受精率和孵化率均较低，主要是由于在亲鱼培育操作中，前期培育不理想，且冬驯培育不规范，试验方案还有许多不足，还需要改进。
参考文献
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[4]刘键，赵德树.史氏鲟的生物学特性及其人工繁殖技术[J].水利渔业，2006，26（1）：26-27
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[15]张涛，庄平等.人工养殖史氏鲟畸形原因探讨[J].海洋渔业，2006，28（3）：185-189


附图
      
附图1 峨眉基地              附图2 峨眉基地水源       附图3 繁殖用亲鱼
      
附图4 人工采卵                   附图5 生理盐水清洗          附图6 创口缝合
                                     腹腔剩余卵粒
            
附图7鱼卵脱粘                附图8 孵化装置             附图9 鱼卵孵化
      
附图10 清除各种坏卵             附图11 破膜出苗        附图12 受精卵孵化

作者联系方式
              姓名：李达付
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              学校：西昌学院
              二级学院：动物科学学院
              班级：09级水产养殖学专业1班
              实习地点：攀枝花跨越水产养殖有限公司

李达付

西伯利亚鲟（♀）×史氏鲟（♂）反季节人工繁殖试验 图片

黄建蓉jane

我暑假也要和老师做鲟鱼的繁殖实验，你还有详细的繁殖资料吗，我们老师想让我们查阅么~

李达付

黄建蓉jane 发表于 2013-6-22 18:20
我暑假也要和老师做鲟鱼的繁殖实验，你还有详细的繁殖资料吗，我们老师想让我们查阅么~

根据我做鱼类繁殖的经验，资料不可信，因为每个人做繁殖的生境不一样，亲鱼培育情况不一样，药物的产地不一样，等等各方面的差异，所以做别人的重复试验，很容易做不出结果来。要做就要做自己的特色，有适合本地区的模式。