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【在线交流】微藻工厂化培养经验分享(已更新完毕)

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    发表于 2016-2-25 12:05:55 |只看该作者 |正序浏览
    本帖最后由 一片云 于 2016-5-22 17:37 编辑


    独家重磅推荐

    微藻工厂化培养经验分享

                                             ——
    唐山三发普林技术员  伏晓斌

    水产前沿网

    时间:    2016年226 19:30


    地点:     1、中国水产频道微课交流1群(语音分享)

                 2、并于中国水产频道  【在线交流】栏目  同步直播


    个人简介:

    水产前沿网

    唐山三发普林技术员  伏晓斌
    学习海洋科学类知识5年,期间藻类培养两年, 目前在唐山三发普林工作,现在主要负责技术服务与市场调查

    分享提纲

    1、工厂育苗培藻的必要性
    2、以金藻为例,分享如何进行工厂育苗培藻
    3、详细阐述工厂育苗培藻的具体步骤(消毒、藻体营养盐配方、接种、培养、日常管理、生长情况的观察)
    4、常见的单胞藻的培养配方分享


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    发表于 2016-11-3 10:47:09 |只看该作者
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    靠西朝海 发表于 2016-11-3 01:50
    您好,老师,请问怎么加您呀?

    我私信给你吧
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    发表于 2016-11-3 01:50:22 来自手机 |只看该作者
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    您好,老师,请问怎么加您呀?
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    发表于 2016-3-12 13:49:57 来自手机 |只看该作者
    求赣州市付近的鱼塘
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    发表于 2016-3-2 11:32:00 |只看该作者
    一片云 发表于 2016-2-29 16:33
    你有在群里面吗?

    那个群?告诉我一下
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    发表于 2016-3-1 09:23:24 |只看该作者
    一片塘 发表于 2016-2-29 21:07
    期待嘉宾分享!  谢谢一片云的解说 谢谢讲的很好

    已经分享了啊,你还想听哪些内容呢?
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    发表于 2016-3-1 09:22:57 |只看该作者
    季文平 发表于 2016-2-29 18:20
    太漂亮了,有些单位个人习惯算法不一,比如ppm,自行校正就好

    对你来说这个不难的
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    发表于 2016-2-29 21:07:38 |只看该作者
    期待嘉宾分享!  谢谢一片云的解说 谢谢讲的很好
      
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    发表于 2016-2-29 18:20:19 来自手机 |只看该作者
    太漂亮了,有些单位个人习惯算法不一,比如ppm,自行校正就好
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    发表于 2016-2-29 16:33:25 |只看该作者
    南湖中华鲟 发表于 2016-2-29 13:52
    跟我以前大规模培养角毛藻差不多,现在复习下。

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    发表于 2016-2-29 14:20:26 |只看该作者
    互动交流环节

      1、小球藻在室外,简易培养是否可行?培养好后是否可以直接给贝类投喂?小球藻的配方?小球藻在培养过程当中会不会把青苔种也培养起来了?
      
      室外培养是可行的。现在也有人在做,我也想往这方面做,室外培养一般是开放池培养,设备简单一点,技术含量也低,投资也少,但是产量会低一些,容易受到自然环境的影响。
      
      苗种易消化吸收,可以通过水的过滤,吸收水体中的小球藻。
      
      小球藻的配方一般都是SE培养基,PR培养基、Bg-11培养基(Bg-11培养基培养蓝藻用的),这几个培养跟F/2培养基十分相似。
      
      现在我做的一般都是工厂化室内水泥池的大规模培养,没有遇到过把青苔的培养起来的情况。
      
      2、你好,老师,我想咨询用浓缩藻液小球藻大规模扩培小球藻方面的知识,如何防虫杀虫?抑制杂藻的生长,还有就是关于小球藻液保存方面的问题,除了低温保存,可不可以添加某些试剂让其不下沉不大量死亡呢?
      
      浓缩方面的介绍,扩培小球藻操作类似于金藻,因为全天是工厂化大规模扩培,很少出现杂藻。在大规模扩培的时候,从二级向三级扩培,小球藻已经成为优势种群,小球藻会产生抗生物质,会抑制其它杂藻、菌的繁殖,因为我是做扩培方面的,只要我杀菌消毒比较彻底的情况下,就很少有杂藻、虫等的出现。
      
      如果是保存,循环移液保存法,方法很简单,而且保存的藻种活力强,纯度高。但保存的量跟仪器的数量有关。
      
      具体的操作:把藻液在规定的时间内(差不多10天或者7天),把藻种过滤到消毒海水之后,再保存,也就是循环移液的保存,保存的时间比较长,一般学校实验室的藻种都是循环移液保存,但仅是保存藻种,而大规模的保存现在用的是买藻种保存的方法(浓缩低温保存法)。
      
      至于添加某个试剂让其不下沉不大量死亡,我没有做过,因为我是直接在育苗厂或者苗场附近,建立车间,直接规模培藻之后,直接运输,浓缩方面是非常方便的,在建厂设计方面已经设计好了的。
      
      3、小球藻培养方式与如何控制藻相?
      
      小球藻的培养方式,类似金藻的培养方式(刚才以金藻为例,就是这个原因)。
      
      至于藻相的控制,如果是土塘则不希望一次肥水,一次肥水很容易肥水过量,因为藻种肥育起来特别迅速之后很容易倒藻,所以希望分批次的添加,而少量多次的添加,控制藻相可以给虾、鱼苗补充开口饵料,为水体补充氧,又能降解氨氮、亚盐等,这是一个养殖经验的积累。
      
      工厂化方面的育苗根据养殖密度等综合条件判断添加的数量。工厂化培育的时候,因为可以直接算出1L水体中有多少藻细胞,添加多少藻细胞不会导致水质等各方面出现问题,这方面也是一个经验的把控。
      
      4、培水稳水水体通常该补充哪些微量元素,比例是多少,时间间隔等有没有一个相对可操作的模式?
      
      通常补充的微量元素,就跟我刚才发的配方一样,一般都是F/2微量元素,F/2微量元素一般都是锌、锰、铜、铁、钼、钴。对于具体比例,不同的藻的含量不一样,如果综合了好几种藻的话,所需最佳量取一个最佳值,如果是单个藻种培养可以直接有微量元素的比例。
      
      现在就像我说的那种,培养工艺上,培养的时候直接一次性添加,把营养盐起始就添加完毕;或者就是混合营养盐添加,前批次添加像大量元素磷酸二氢钾,硝酸钠,之后再添加(如果培养硅藻的话)硅酸钠或者碳酸氢钠等,也可以用碳酸氢铵代替碳酸氢钠加入。
      
      所谓时间间隔,微量元素一般都是一次性添加,计算单位水体需要添加多少,目前都是这么添加的。
      
      5、绿藻,硅藻,隐藻,甲藻的生命周期是多少天。藻毒素是怎么产生的。
      
      藻细胞具体的生命周期我不知道,如果生存环境适宜了,能够延长指数生长期十几天,如果把培养藻的模式变成连续培养,一边补充水体的营养盐和添加消毒过的海水,一边取出藻液,可以连续生长,连续生长的时候,藻细胞会分裂生殖,所以我也不知道它具体是多久。
      
      藻毒素就是藻体死亡的时候,藻细胞若不能及时的被分解,释放的物质应该就是藻毒素。
      
      6、土塘中及水泥池中硅藻的培育简便配方。
      
      如果是简单的硅藻水池培育的话一般,硝酸铵/磷酸二氢钾/硅酸钠=10/1/2于1000ML消毒海水
      
      中,这是个比例。期间可以添加维生素VB1:100mg  VB12:1mg  VH生物素:1mg
      
      7、培藻过程中如何有效控制黄绿菌以及原生动物?
      
      有微生物制剂可以控制黄绿菌数量,因为我对菌这块不是很了解,可以请教其他高手,我在试验、生产中消毒一般很少遇到。
      
      8、硅藻(海链藻、角毛藻)的最高耐受温度是多少?
      
      角毛藻最高耐受温度应该是30度,海链藻我不清楚。
      
      9、对藻类进行离心浓缩会破坏其组织和营养吗?
      
      对藻类进行离心浓缩会减少其营养含量,像脂肪酸、蛋白质,假设含50%,会减少到40%,但是对组织的破坏一般不会,现在离心浓缩,在国内运用最广泛,其优越性不言而语,破坏的话就不会在国内广泛应用的。
      
      10、a  微藻浓缩 抽滤是如何实现的
      
      现在有超滤技术浓缩,过滤工具“板框式超滤器”,压力泵,不锈钢容器(20L),不锈钢管路,冷却系统。
      
      超滤是一项新型的膜分离技术,它以膜两侧的压力差为推动力,在被处理料液流经表面具有微小孔径的不对称结构超滤膜时,实现不同分子量物质的分离等物理分离过程。
      
      还有一个是离心,国内应用最广泛的。
      
      气浮和沉降:用明矾、氯化铁对藻细胞起絮集、凝集、沉降的那种,把藻液分离之后收集
      
      抽滤浓缩怎么做?找制作的厂家,直接看说明书制作就行。
      
      b、抽滤以后是什么样子,泥?膏?液体?
      
      用机器抽滤完之后有一层膜,像膏也像软泥。
      
      c、抽滤以后怎么保存,可以保持多久活性?
      
      藻细胞保存的方式速冻和缓慢的渐冻有关,这两种方式会对藻细胞的营养物质造成一些损失,一个能够把藻细胞的营养物质保存一95%一个是80%多(假设量),所以这个看要保存多久和各方面综合选择你要保存的方式,个人用途不同,有些人用藻是做饵料,有些是长途运输做藻种,就看具体的用途来保存。浓缩保存3个月后进行再培养试验,其生长曲线与标准再生长曲线相似,但曲线中延缓期稍长,可能由于浓缩液中营养盐浓度相对较低的缘故。
      
      d、浓缩藻 金藻 硅藻 扁藻都有吗
      
      金藻现在普遍都是细胞低温保存技术,是可以浓缩的。
      
      扁藻也有浓缩的,像超滤浓缩
      
      但是硅藻我没有用过浓缩,所以不是很清楚,按照其他藻种浓缩,理论可以。
      
      11、海水藻类如何控制细菌感染和细胞密度的问题
      
      我所知道的,我做的时候是做到无菌操作,当然也要看藻种,有些藻种是需要细菌协同的,需要菌来刺激它,才能相互生活得更好,大部分藻种有菌之后会产生拮抗抑制,协同的有个骨条藻,蛏的在开口饵料里面就是骨条藻。
      
      当然细菌控制的时候我的操作一般都是,我在操作实验和生产实践的时候,首先对口罩、手套经过70%的酒精消毒,还有就是各方面的药品都有消毒,尽量做到无菌操作。
      
      控制细胞密度,这个密度如果是土塘、工厂化育苗的话,育苗池的密度可以通过进水、排水的方法控制。控制密度的方法简单就那几种。
      
      我做的是规模化爆发的增长,所以很少会想到控制生长,只能想到进水排水这种了。
      
      细菌方面我尽量做到无菌操作,我对细菌这方面了解比较少,我尽量操作规范使细菌少地点,这样提高成功率。
      
      12,用次氯酸钠消毒海水怎样中和余氯?若果我1吨的水消毒后中和用的硫代硫酸钠刚好是20克,那么中和前的有郊氯是多少?若过量的硫代硫酸钠对藻类影响大吗?过量到什么程度才会造成大有影响?
      
      这个比较专业性,如果是硫代硫酸钠刚好是20克应该是中和前有效氯16克一立方水体中,过量肯定会造成影响。我在上面已经发一个硫代硫酸钠的余氯测试的操作过程,大家可以看看。我很少碰到过量的情况。影响肯定有。
      
      13、海洋微藻养殖单独作为独立产业如何发展?例如,小球藻可以作为保健品。国内目前的海洋微藻产业发展状况?
      
      这个问得有点大了,这个方面需要大家共同探讨,现在已经作为独立的产业发展了,在印度、英国、日本、新加坡和台湾等把藻作为保健食品,食品添加剂、色素和应用医疗方面、水产饵料和处理污水方面也有,我在大学的时候有学过石油泄漏的时候用培养藻种分解石油,防治污染水体,改善水产养殖水体的环境,当然还有一个重要的就是培养燃料,藻类可以代替燃料,是可以发展的,国家重点基础研究发展计划(973计划)好像都有提及这方面。现在这方面正在发展,还不是很规范。
      
      15、能不能定向培养小球藻来用于养殖,怎样保持,日常怎样管理,密度不用高,水体透明度40公分,怎样保持30天。室外养殖
      
      定向培藻是绝对可以的,怎么保持日程管理和密度不高,因为小球藻的分裂速度算最快的了,活性非常强,很难管控,造成在水产养殖中很少有大规模的繁殖,因为繁殖多了肯定会造成倒藻,如果想要控制好要小范围试验,分批添加小球藻,营养盐等,目前我的水平保证不了稳定30天。海南有说卵囊藻在水中稳定生存20天左右。卵囊藻往这方面正在运用,也有产品在市面流通。为什么不用小球藻,就是因为现在小球藻根本控制不来,你想想养一造虾3个月,如果连续2-3次稳定30天,结果非常可观了。小球藻定向培藻,我想往土塘这块发展,所以我在天津这块在弄,今天讲这个就是希望有这个基础配方,想自己尝试的,可以自己来总结经验。不用一次性定向培藻过多,而是多次分批次的添加,掌握一些经验再相互学习交流。
      
      16、能否提供一个淡水三级培育小球藻的配方
      
      小球藻,Bg-11培养基,我在学校的时候用过,它主要用于培养蓝藻,但它可以是淡水培养应用的,也可以海水培养小球藻,这些你可以尝试一下,
      
      17、1L水体应有多少的藻细胞为合适?是指藻细胞的生物量吗?您改良的配方给大家分享一下好么?
      
      1L水体应有多少的藻细胞为合适?你养的品种(鱼虾、扇贝,品种)不一样,单位水体需要的藻类细胞肯定不一样,各地环境差异,所以各地是不一样的。
      
      改良配方我刚才给大家的配方是可以培养金藻这类的。

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    发表于 2016-2-28 12:54:06 |只看该作者
    wx_JX69QC7I 发表于 2016-2-26 23:24
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    发表于 2016-2-26 23:24:08 来自手机 |只看该作者
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    发表于 2016-2-26 21:29:58 来自手机 |只看该作者
    谢谢嘉宾的精彩分享
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    发表于 2016-2-26 20:32:32 |只看该作者
    本帖最后由 一片云 于 2016-2-29 12:08 编辑

      现在很多情况下我们都是藻种培养规模培育之后,很多人希望运用到土塘培养方面,土塘水质调控、开口饵料等方面(单位幼苗生物饵料投喂量),但是给土塘如何泼洒、如何控制那个量,起到最好的增氧效果方面,我在天津做的时候我的一个老师建议我别往这方面做,因为各地环境因子等不同,在室外培养受到天气、气候等的影响,不利于培养。
      
      所以我只是以金藻为例,把培育藻的简单的操作和需要注意的一些点跟大家交流一下,希望有能力、有想法的、自己想做的可以往土塘方面发展,因为个人能力有限,各地情况不同,我也总结不了这么多东西。


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    发表于 2016-2-26 20:32:03 |只看该作者
    本帖最后由 一片云 于 2016-2-29 14:29 编辑

      以下是常见的单包藻的培养配方
      
      中国科学院海洋研究所海洋生物种质库
      
      这些配方跟我所做的有些差距,仅供参考
      
      海洋单胞藻培养液配方
      
      1、一般用培养液配方
      
      NaNO3                          0.03克
      
      CO(NH2)2                      0.03克
      
      KH2PO4                       0.005克
      
      FeC6H5O7(1%溶液)               0.2毫升
      
      维生素B1                      200微克
      
      维生素B12                    200毫微克
      
      人尿                           1.5毫升
      
      海水                          1000毫升培养
      
      绿藻、金藻、硅藻使用,培养硅藻时添加0.02克/升硅酸钠。
      
      2、绿藻培养液配方
      
      2.1  海洋3号扁藻培养液
      
      NaNO3                          0.1克
      
      K2HPO4                        0.01克
      
      Fe(SO4)3  (1%溶液)               10滴
      
      2Na3C6H5O7.11H2O                0.02克
      
      海水                             1000毫升
      
      2.2  亚心形扁藻培养液
      
      NaNO3                           0.05克
      
      KH2PO4                          0.005克
      
      FeC6H5O7  (1%溶液)              0.2毫升
      
      维生素B1                        200微克
      
      维生素B12                       200毫微克
      
      人尿                             2毫升
      
      海水                             1000毫升
      
      3、硅藻培养液配方
      
      3.1、湛江水产学院硅藻培养液
      
      NaNO3                          0.08克
      
      K2HPO4                         0.008克
      
      FeC6H5O7  (1%溶液)             0.2毫升
      
      Na2SiO3                         0.02克
      
      维生素B1                       200微克
      
      维生素B12                      200毫微克
      
      人尿                            1.5毫升
      
      海水                            1000毫升
      
      培养三角褐指藻、小新月菱形藻、钙质角毛藻、牟氏角毛藻。
      
      3.2、中肋骨条藻培养液  KNO3                          0.4克
      
      Na2HPO4.2H2O                 0.04克
      
      K2SiO3                        0.02克
      
      Fe(SO4)3.7H2O                  0.014克
      
      土壤提取液                      15毫升
      
      “920”植物生长激素           4~5国际单位
      
      海水                          1000毫升
      
      3.3  牟氏角毛藻配方
      
      NH4NO3                       5~20毫克
      
      KH2PO4                        0.5~1毫克
      
      FeC6H5O7.3H20                 0.5~2毫克
      
      海水                           1000毫升
      
      4、金藻培养液配方
      
      4.1  “f /2”培养液
      
      NaNO3                          74.8毫克
      
      NaH2PO4                       4.4毫克
      
      Na2SiO3.9H2O                  8.4~16.7毫克
      
      f /2微量元素溶液                  1毫升
      
      f /2维生素溶液                    1毫升
      
      海水                             1000毫升
      
      4.2  等鞭金藻OA-3011培养液(陈椒芬等)
      
      NaNO3                          0.06克
      
      K2HPO4                       0.004克
      
      FeC6H5O7                      0.5毫克
      
      Na2SiO3                        0.005克
      
      维生素B1                   100~500微克
      
      维生素B12                   0.5~1.5微克
      
      NaHCO3                          1克
      
      海水                          1000毫升
      
      二、   微量元素溶液配方
      
      1、A5-B6微量元素溶液配方A5:
      
      H3BO3                     2.86克
      
      MnCl2.4H2O                1.81克
      
      ZnSO4.7H2O                0.22克
      
      CuSO4.5H2O                0.08克
      
      Na2MoO4                  0.021克纯
      
      水                      1000毫升
      
      H2SO4 (浓)                 1滴
      
      B6NH4VO3                   229.6毫克
      
      Cr2(SO4)4.24H2O            960.2毫克
      
      NiSiO4.6H2O               447.8毫克
      
      Co(NO3)2.6H2O             493.8毫克
      
      Ti溶液                       20毫升
      
      0.2摩尔/升 H2SO4           1000毫升
      
      Ti溶液配法:把736.6克草酸钛溶解于少量纯水中,加入氢氧化铵使成碱性,发生沉淀。用离心机将沉淀集中,用0.2摩尔的硫酸20毫升溶解。用量:每1000毫升培养液中加入A5、B6溶液各1毫升。
      
      2、“f /2”微量元素溶液
      
      ZnSO4.4H2O                23毫克
      
      MnCl2.4H2O              178毫克
      
      CuSO4.5H2O               10毫克
      
      FeC6H5O7.5H2O              3.9克
      
      Na2MoO42H2O             7.3毫克

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    发表于 2016-2-26 20:31:37 |只看该作者
    本帖最后由 一片云 于 2016-2-29 12:07 编辑

      最后一般都是生长情况的观察。
      
      生长情况的观察首先是观察颜色。金藻生长良好时呈金褐色。接种后,随着藻类的细胞浓度逐渐增加,正常情况颜色由浅变深。若颜色由深变浅则可能是由于环境因子不适宜引起的;若出现其他颜色,如蓝色、黄色、乳白色等,说明被其它污染了。
      
      藻体颜色保持原色的时候说明藻体没有死亡,可能还在休眠,藻体是有自我保护机制得,有可能是环境因子导致藻体自我保护了,如果环境较好的时候,活化一下,藻种还能正常生长。但如果藻体变成灰白色说明藻体已经开始死亡、腐败。
      
      接下来从藻种的运动和沉淀来看,金藻在显微镜下观察时有鞭毛,但运动缓慢,一般不会迅速上浮,而是形成趋光带,细胞群成线状上浮。当环境不适时,藻类会下沉形成沉淀,当环境变好时则上浮。如果在环境条件正常时藻液大量沉底,出现沉淀,而且经过搅拌后又很快下沉,则是不正常现象。沉淀藻体的颜色如果保持原色,说明还没有死亡,有可能恢复正常生长。如果藻体变成灰白色,则藻类已死亡。这就是我刚才说的藻体颜色判断时候可能出现的情况。造成藻类沉淀的原因是多方面的,但主要的原因是环境不良或营养不足使藻类的生长受到抑制。
      
      还有一个附壁现象,金藻我在培养的时候很少出现附壁现象,我在培养的时候扁藻、绿藻很容易出现附壁,聚集成团之后沉底的情况。如果聚集沉淀有可能是菌膜,即生物污染物(有细菌大量繁殖的时候,藻细胞可由菌膜互相粘黏而形成团块状)。
      
      最后一步就是藻体培育成功之后的采收,采收现在一般都是用水泵直接抽取藻液,然后进行超滤过滤,最后收集浓缩藻液。现在的浓缩技术有抽滤、聚沉、上浮等。

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    发表于 2016-2-26 20:31:11 |只看该作者
    本帖最后由 一片云 于 2016-2-29 11:48 编辑

      日常管理是非常重要的一块,跟消毒一样。比如你培养了30m3的水池,如果你培养时从颜色等感觉还行,突然之间有可能全部死亡,可能是你日常管理不规范、不细致,引起杂菌繁殖和无法探知的原因导致培养的藻体全部死亡。
      
      
      首先日常管理的第一步,搅拌和充气,就像一级培养,一级培养就是保种,我会在保种间每天3次(早、中、晚)摇晃锥形瓶,使其均匀分布,不会粘黏器壁。二级培养需要增加气石来补充二氧化碳的量,或者摇晃容器。三级培养需要搅拌棒和气石给金藻补充二氧化碳.
      
      摇晃、搅拌和充气一般都是补充二氧化碳,防治藻之间产生菌膜,还有均匀受光、池底、矿泉水桶里面的藻类上浮获得光照。
      
      搅拌充气最好每天定时进行三次,每次大约在半分钟左右就可以了。
      
      调节光照这块,一般的藻类不能忍受强烈的直射光照,车间顶部一般都是用透明玻璃钢瓦采光。光弱的时候需要增加人工的光源,如日光灯、碘钨灯。
      
      根据藻种所需的最适光照强度范围,1w的灯大概是12.6Lx左右的能量,像金藻需要的最适光照强度(球等鞭金藻7000-9000,湛江等边金藻5000-11000)可以根据灯光计算出来所需多少瓦灯,直接补充多少的光照就可以正常生长。
      
      高温不利于生长,夏季室内培养的时候一般需要通风降温,通风降温在北方一般夏季用风扇,北方冬天气温低,一般室外也不能培养,室内一般采取水暖、气暖等措施来供暖。
      
      有条件的车间,会在天窗加盖纱窗布,防止蚊虫进入,在藻体的水体中产卵。如果发现其产卵或昆虫的尸体,需要及时捞掉。刮大风的时候要尽量避免泥土、杂物等吹入培养池、因为泥土里面含有大量的细菌等。


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    发表于 2016-2-26 20:30:48 |只看该作者
    本帖最后由 一片云 于 2016-2-29 11:51 编辑

    4培养
    培养方式
    纯培养和单种培养
    充气和不充气培养
    开放式培养和不开放培养
    一次性培养和连续性培养

    培养工艺,金藻培养有一次性施肥、混合营养盐的施肥和碳酸氢钠分批次的施肥。金藻在国内现在应该是开放式半连续培养。

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