微生态净水剂对鲤血液生理生化指标的影响

cjlittlepig

摘自《水生态杂志》

摘要：实验研究了微生态净水剂对鲤血液生理指标和生化指标的影响。施加微生态净水剂65ｄ后，显著降低了鲤红细胞的渗透脆性，使红细胞数由112.60万个／ｍｍ３ 显著增加到122.40万个／ｍｍ３（Ｐ＜0.05）；血红蛋白由4.60ｇ／100ｍＬ极显著增加到6.90ｇ／100ｍＬ（Ｐ＜0.01）；红细胞压积由35.2％显著增加到39.2％（Ｐ<0.05）；血清中TP、ALB、GLO、白球比的含量无明显变化；血清中GLU、ALP分别较对照组提高了221％（Ｐ＜0.01）、51％（Ｐ＜0.05）；血清中ACP、GPT分别较对照组降低了14％（Ｐ＞0.05）、24％（Ｐ＜0.05）。微生态净水剂能优化鲤的抗应激指标，提高鱼体防御功能，增强抵抗疾病的能力。

关键词：微生态净水剂；鲤；血液；生理指标；生化指标

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    随着水产养殖业的迅猛发展，未经处理的养殖废水、工业和生活污水的任意排放，使天然水域受到污染，养殖生态环境恶化，导致水产动物的病害问题日趋严重。为了保护生态环境和人类健康，我国开始将微生态制剂应用于水产养殖中。微生态净水剂是由光合细菌、乳酸菌、节杆菌、硝化细菌等微生物复合培养而成的，该制剂无毒、无副作用，不产生耐药性，能有效改善养殖生态环境，增强动物的抗病能力，减少病害的发生，是一项有利于水产养殖健康的新技术（陈文忠等，2004；瑞君和魏银萍，2005；官琼等，2005）。目前，微生态净水剂在整个水产养殖中大多数是直接作用于水体。李卓佳等（2005）报道了微生态净水剂能抑制病原微生物和有害物质，调节生态环境，促进养殖生态系统中的正常菌群和有益藻类的生长；关于微生态净水剂对鱼类血液生理生化指标影响的研究尚无报道。本文通过在鲤养殖水体泼洒一定浓度的微生态净水剂，了解其对鲤血液生理生化指标的影响，为改善鱼的体质，实现绿色无公害养殖提供一定的理论依据。

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1材料和方法
1.1实验材料
    鲤材料鱼采自天津市宁河县海天养殖场，试验于2007年４月中旬开始。实验鱼为杂交鲤平均体长（20.1±4.5）ｃｍ，平均体重（92.75±16.01）ｇ。采用除氯自来水，温度（11.2±1.9）℃，试验前至少在室内驯养5ｄ，试验前1ｄ不投喂，随机选取个体差异不大、健康活泼的鲤用于实验。实验分为２个实验组和２个对照组，各组分别采用1000ｍ３的圆形水泥水槽中，每组随机放养鲤120尾。
    微生态净水剂购自厦门利洋水产品有限公司，含有光合细菌、枯草芽孢杆菌、硝化细菌、节杆菌，含菌量为10×10９个／ml。
1.2饲养管理
    实验用充气泵充氧，使溶解氧保持在5.0mg／Ｌ以上，每天监测水温、溶氧、pＨ值。每3ｄ天测定水质（ＮＯ３－Ｎ、ＮＯ２－Ｎ、ＮＨ４＋ －Ｎ），每5ｄ加水质净化剂30ml／ｍ３，每隔15ｄ换１次水（换水30％ ～50％）。投饵率２％ ～３％，以30min吃完为限，每天早、中、晚各投喂１次，并及时清除残饵；实验期为65ｄ。
1.3方法
1.3.1血样制备　
    实验结束后，鲤饥饿１d，在同一时间采其血液样品，用１％肝素钠处理的注射器，从尾动静脉取血，一部分直接加入5.0ｍＬ离心管中，４℃静置２ｈ，2500ｒ／min、４℃离心25min，以制备血清，用于各项生化指标的测定；另一部分用１％的肝素钠抗凝，以制备抗凝血用于各项生理指标的测定。
1.3.2生理指标及测定方法　
    红细胞计数（RBC）、白细胞计数（WBC）用常规计数法；血红蛋白含量（Hb）用沙利氏比色法；红细胞压积（HCT）、红细胞沉降率（ESR）采用Westergren法。
    血沉方程Ｋ值＝－ＥＳＲ／［lnＨＣＴ＋（１－ＨＣＴ）］
    ＶＩ＝ＨＣＴ×２．３/（ＲＢＣ×２０）
    ＣＩ＝Ｈｂ×６．９/（ＲＢＣ×２０）
    ＳＩ＝Ｈｂ×６．９/（ＨＣＴ×2.3）
    平均红细胞体积（ＭＣＶ）＝ＨＣＴ×１０/ＲＢＣ
    平均红细胞血红蛋白（ＭＣＨ）＝Ｈｂ/ＲＢＣ
    平均红细胞血红蛋白浓度（ＭＣＨＣ）＝Ｈｂ×１０/ＨＣＴ
    红细胞渗透脆性采用汉伯格－里比拉方法测定（桂远明，２００４）
1.3.3生化指标及测定　
    所有生化指标在Microlab300半自动生化分析仪上完成。血液生化指标测定方法见参考周玉等（2002）报道，在24ｈ内完成测定；得到的血清立即进行血糖指标的测定。
1.3.4水质指标的测定方法　
    ＮＨ４＋－Ｎ采用奈氏试剂法测定；ＮＯ２－Ｎ采用重氮－偶氮比色法测定；ＮＯ３－Ｎ采用锌镉还原－重氮偶氮法即镉柱还原法（雷衍之等，２００６）。
1.4数据处理
    所有数据均为２０个样品的平均值，以平均值±标准差（Ｍ±ＳＤ）的形式表示。由SPSS13.0程序包进行生物学统计，用ｔ检验使用微生态净水剂前后各指标变化的显著性。

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2结果与分析
2.1微生态净水剂对养殖水质的影响
    由图１可见，养殖水体的氨氮随着时间的推移呈现先上升、后下降、再上升的趋势，但微生态净水剂组氨氮的上升的幅度明显较低，下降的幅度明显较高且持续的时间很长。由此可见，水质净化剂具有降低氨氮的作用，随着养殖时间的延长，净水效果更加明显。
2.2血液生理指标
    由表１可见，添加微生态净水剂的实验组能优化鲤的血液学指标，特别是红细胞数、血红蛋白含量、红细胞压积以及血沉、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白、平均红细胞血红蛋白浓度均较对照组显著增加（Ｐ＜0.05）；其中，血红蛋白含量、血沉方程、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白较对照组极显著增加（Ｐ＜0.01）；白细胞数试验组较对照组差异不显著（Ｐ＞0.05）。
    从图２可以看出，实验组较对照组的渗透脆性曲线左移，红细胞渗透脆性减少，当NaCl浓度达到0.43％时，对照组的溶血率就已经达到了100％，说明微生态净水剂能提高鲤红细胞对低渗盐溶液的抵抗能力，表明微生态净水剂组的鲤红细胞的刚性较强。
2.3血液生化指标
    从表２可以看出，实验组与对照组相比，血清中TP、ALB、GLO、白球比的含量无明显变化，TG、γ球蛋白、GLU分别较对照组提高了354％（Ｐ＜0.01）、78％（Ｐ＜0.05）、221％（Ｐ＜0.01），ALP提高了51％（Ｐ＜0.05），ACP活性和GPT活性分别较对照组降低了14％（Ｐ＞0.05）、24％（Ｐ＜0.05）。

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3讨论
3.1微生态净水剂对鲤生理指标的影响
    血液生理指标在一定程度上反映出养殖对象的营养和机能状态。尾崎久雄（1982）研究发现，鱼类在饵料不充足、水质条件恶劣的情况下，红细胞数目和血红蛋白含量将下降。本研究结果表明，微生态净水剂处理后，鱼类的红细胞数、血红蛋白含量、血细胞比容明显高于对照组，这与伍莉和陈鹏飞（2006）的研究结果一致。鱼类红细胞数、血红蛋白和血细胞比容指标的上升反映了血液输氧能力的升高，当环境条件改变时，导致鱼体需氧量减少，进而使代谢水平降低，但微生态净水剂组鱼类会适应此环境条件的改变，说明微生态净水剂能够提高鲤的应激能力。引起血细胞全部溶血的NaCl浓度即为红细胞最大抵抗值，用红细胞渗透脆性表示（桂远明，2004）。微生态净水剂对鲤红细胞的溶血率极显著降低，使渗透曲线左移，说明施加微生态净水剂可以使鲤红细胞的刚性增强，增加其对外界低渗盐溶液的抵抗能力，有利于提高鲤对外界水环境改变的适应性。
3.2微生态净水剂对鲤生化指标的影响
    动物血液的生化参数是动物机体健康状况的主要指标，也是疾病诊断的依据之一。鱼类血液中的生化指标在正常情况下比较稳定（周玉等，2002）。但是当鱼体生长环境改变或发生病变时，许多生化指标会发生明显改变，并以此判断鱼体的生理变化，用于鱼类疾病的诊断和环境监测。当肝脏、心肌病变，细胞坏死或通透性增加时，酶即释放于血清中，某些生化指标的活性便会升高。因此，动物血清的生化指标是动物机体健康状况的主要指标，也是其疾病诊断和测定的依据之一（刘志强等，1999）。
    本实验中，微生态净水剂组的ACP、GPT的活性明显低于对照组，说明微生态净水剂可以促进养殖鱼类的健康生长，提高鱼体的免疫能力，增强养殖鱼类的抗病力，这与翟秀梅等（2007）的研究结果一致。微生态净水剂促进养殖鱼类的健康，可能是其能改善养殖水体的水质，起到加强有机物的降解、提高水体自净能力的作用；水体环境得到改善，则可以间接地促进养殖鱼类的健康。本次实验，微生态净水剂使鲤血清中转氨酶活性降低，可能是其通过鳃组织渗透进入血液循环，在肝脏中参与脂肪代谢，降低了脂肪的含量，避免了脂肪肝的发生，其作用机理有待进一步研究。90％以上的血清总蛋白和白蛋白是肝脏合成的，因此，其检测数据是反映肝脏功能的重要指标。微生态净水剂组总蛋白和白蛋白高于对照组，说明其对肝脏蛋白质的合成有良好的促进作用。碱性磷酸酶不仅与磷代谢密切相关，而且是重要的解毒体系。本次实验结果表明，微生态净水剂组血清中碱性磷酸酶的活性明显高于对照组，进一步说明施加微生态净水剂能够提高鱼体的解毒能力。施加微生态净水剂后，鲤的血液生理和生化得到了优化，提高了鱼体的应激能力，表明了微生态净水剂具有安全性和有效性，在水产行业将有良好的发展前景。