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TA的每日心情 | 堵心啊 2015-6-5 08:56 |
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签到天数: 61 天 [LV.6]常住居民II - 帖子
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本帖最后由 Say-say 于 2011-9-9 15:05 编辑
第二位报告专家:中国农业科学院饲料研究所农业部饲料生物技术重点开放实验室 周志刚研究员
报告主题:新型水产饲用酶制剂N-酰化高丝氨酸内酯酶(淬灭酶):从基因挖掘、高效表达、性质研究到综合应用
摘要:N-酰基高丝氨酸内酯酶 (N-acyl homoserine lactonase) 是一类特异性降解N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)类信号分子的淬灭酶。该酶广泛存在于多种生物中,能有效的降解AHLs,从而阻断细菌间的信息交流,防止病原菌的感染,是抗菌药物研究的新靶点。目前主要是通过构建转基因植物、转基因细菌研究其在病原菌防治中的作用机制,及实际应用中存在生物安全和有效性方面的问题。水产养殖中的主要致病菌均属革兰氏阴性菌,且在这些菌种中或其所在属中均已发现QS现象或直接检出信号分子-AHLs。水体特殊环境中,现行防止这些致病菌的方法存在不足。新颖的群体感应淬灭酶的发现,为防治水环境细菌侵染提供了可行的途径,淬灭酶可以预防多种感染疾病,降低细菌耐药的流行,弥补了现行抗生素药物的不足。但是,要真正的体现N-酰基高丝氨酸内酯酶在水产养殖疾病预防上的意义,一方面需要确定该类酶制剂在实际应用中的预防效果和宿主中的预防机制;另一方面需要大量的性质优良的酶进行应用的研究。由此本试验从以上内容开展研究,并得出以下结论:
1. 通过实时定量PCR(q-PCR)对饲喂添加水环境分离芽孢杆菌 (Bacillus sp. B546)来源地AiiA-B546(酵母表达)的斑马鱼感染水环境病原菌Aeromonas hydrophila NJ-1 (Ah NJ-1) 后免疫相关细胞因子表达量检测的结果显示,Ah NJ-1中受QS调控毒力因子刺激所引发的免疫应答相关的细胞因子(包括IL-1、IL-10、IFNγ、TLR5b)在添加AiiA-B546后表达量正向变化(即毒力因子减少后应有的变化趋势);同时梯度变性电泳(DGGE)对上述斑马鱼长期饲喂后肠道菌群检测结果显示,饲喂添加AiiA-B546后Ah NJ-1的粘附性受到了严重的影响,饲喂4周后在添加酶组中未能检测到Ah NJ-1(未添加酶组可检测到)。实验结果表明AiiA在水产养殖中作为一种新型的生防酶制剂在作用机制上具有可行性。
2. 目前,研究最为深入的N-酰基高丝氨酸内酯酶是来源于Bacillus的AiiA类内酯酶,但耐热性较差是该酶的一大不足,由此限制了其应用范围。因此,发掘耐热性更好的新酶,成为目前研究的一个努力方向。克隆获得来源于分离自池塘底泥Bacillus sp. AI96的N-酰基高丝氨酸内酯酶AiiA-AI96。大肠杆菌表达系统进行异源表达后获得纯酶性质测定显示该酶最适反应条件为温度10–40°C,pH 8.0。该酶除具有其他AiiA酶类特点,最突出的特点是具有良好的热稳定性,在70℃下处理60 min后酶活剩余约95%,80℃处理5min后酶活剩余约50%。此外该酶对多种蛋白酶及鱼肠道粘液均有较好的耐受性。饲喂添加AiiA-AI96对Ah NJ-1感染的斑马鱼具有良好的保护作用。因此该酶作为新型水产生防饲料添加剂具有广阔的应用前景。 |
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